Bradford法测定蛋白质含量应如何克服不利因素对测定的影响?【点击查看详情】
Bradford法,或考马斯亮蓝法,是一种简便快捷的蛋白质含量测定法,其原理基于蛋白质与考马斯亮蓝结合后颜色的变化,光吸收值与蛋白质浓度成正比。在2分钟内,蛋白质与试剂迅速形成稳定的结合物,尤其在室温下,其稳定性极高。然而,这种方法并非无懈可击,存在一些不利因素影响测定结果。首先,特定蛋白质的结构可能导致反应效果不一致。例如,小分子碱性多肽如核糖核酸酶或溶菌酶可能不适合此法,去污剂如TritonX-100、SDS、NP-40浓度超过0.2%时会对结果产生干扰。此外,蛋白质中精氨酸和芳香族氨基酸含量的差异,使得不同蛋白质在使用考马斯亮蓝法时,测定结果可能存在较大偏差。为减小这种偏差,通常会选择g-球蛋白作为标准蛋白质来制作标准曲线。
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