T4连接酶是一种常用的DNA连接酶，在16至25°C下进行连接反应。T4连接酶在4°C下可以进行连接反应，连接效率会大大降低。需要在较低温度下进行连接反应，可以使用其他类型的连接酶，如TaqDNA连接酶和E.coliDNA连接酶，在低温下的连接效率会更高。