如何分析real-time PCR结果【点击查看详情】
对于相对定量的实验,采用SYBR Green染料是常见的方法。内参基因一般选用18S rRNA,而目的基因则根据实验需求选择相应的序列。实验设计中,内参基因包括对照组和实验组,目的基因也是如此。实验通常设置三个平行样本,以确保数据的可靠性和准确性。在数据处理过程中,首先计算每个样本内参基因和目的基因的平均Ct值。然后,计算目的基因与内参基因之间的相对表达量,即计算△Ct值。具体来说,对于每组样本,我们用目的基因的Ct值减去内参基因(如18S rRNA)的Ct值,得到△Ct值。接着,我们计算对照组与实验组之间的相对表达量差异,即△△Ct值。