因为分光光度法的要求。测定叶绿素a含量需要利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收多个波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素a和叶绿素b在5nm和663nm处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm处。因此测定提取液的定量依据在5nm、663nm、652nm波长下的吸光值。