染色时间太长。染色时间过长可能导致颜色过深，尝试缩短染色时间，以获得理想的染色效果，在染色完成后，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）或其他适当的缓冲液冲洗细胞，以去除多余的油红O染料，可以适当延长冲洗时间，直到将多余的染料去除干净。