引物长度一般为15-30bp，不能大于38bp。引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近。引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3的下降形状也有利于引物与模板的结合。