茚三酮显色法。
1、标准曲线的制作:取20ml刻度试管18支,加入各试剂。加完试剂后混匀,在100摄氏度水浴中加热12分钟(加热时封口),取出在冷水中迅速冷却,立即于每管中加入5毫升95%乙醇,塞好塞子,猛摇试管,使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色,此时溶液呈蓝紫色。于570纳米波长下测其光密度(以空白管为参比),以氨基酸浓度为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出直线方程。
2、样品提取:选取有代表性的植物叶片(或其它组织),洗净擦干,剪碎混匀,迅速称取0.10到0.20克(视氨基酸含量多少而定),共称3份,分别加入20毫升刻度试管中,再加蒸馏水10毫升盖塞(或系上塑料薄膜),置沸水浴中20分钟以提取游离氨基酸,到时取出在自来水中冷却,把上清液滤余汪入25毫升容量瓶中,之后再往试管中加5毫升蒸馏水,置沸水浴上再加热10分钟,过滤并反复冲洗残渣,最后定容至刻度,摇匀。
3、样品测定:另取4支洁净干燥的试管,其中3支分别加入0.5毫升提取液,另一支加0.5毫升蒸馏水,然后在上述4支试管中分别加入NaCN缓冲液、水合茚三酮各0.5毫升,加完试剂后盖塞,置沸水浴上加热12分钟,冷却后,再分别加5毫升95%乙醇,摇匀,以空白作参比,在波长570纳米下测其光密度尺宏。
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