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黄曲霉毒素检测方法 黄曲霉菌是什么
2023-07-17 06:52:56 责编:小OO
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黄曲霉毒素,一种常见的腐生真菌,是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物,产生的黄曲霉毒素主要有b1,b2,g1,g2,和m1,m2。

关于黄曲霉菌

黄曲霉和寄生曲霉广泛存在于土壤,灰尘,植物及其果实上,通常温度在5℃到45℃之间之间都能形成,尤其是在潮湿或者是病虫害等情况下会加剧形成速度。一旦形成繁殖速度通常也是比较快的。而且环境的酸碱性对其影响不大,在pH2—9的条件下都能生成黄曲霉毒素。

另外简单的高温杀毒也很难起效,只有温度接近300℃分解才明显。而且黄曲霉还能在含氧量极低的环境中生长,在缺氧环境中发酵。即使在充填二氧化碳的冷库中,黄曲霉的生长也不受影响,不过能明显地延缓黄曲霉毒素的形成。所以一旦黄曲霉毒素在食物中形成,通常的加工手段都很难将其杀死。这种霉菌大多数存在于不新鲜的种子及食物当中,尤其是在花生和玉米种子中更为常见。

黄曲霉菌对人体的伤害以及家庭食物的储存方法

从以上的分析中我们会发现一个问题,那就是我们生活中的很多食品都容易污染黄曲霉毒素。而我们又很容易吃了被黄曲霉毒素污染的食物,那么人吃了含有黄曲霉毒素污染的食品之后会对人体造成哪些不利影响呢?我们该如何避免黄曲霉毒素的污染呢?

黄曲霉毒素于1993年被世界卫生组织(WHO)癌症研究机构划定为一类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。另外如果长期小剂量的毒素还会造成慢性肝炎,儿童生长迟缓,成年人不孕等疾病。

为了避免我们的食物中的黄曲霉菌生成,同时根据黄曲霉毒素的生成特性我们自己家可以采取以下方式储存这些粮谷类食物:

a干燥  把食物放在通风处保存,比如大米及杂粮,如果有时间比较长且已经有些潮湿可以在阳台晒干,或者放在微波炉里边烘烤干燥

b冷藏食用量不大的食物通常干燥之后放入密封严密的保鲜盒中放入冰箱冷冻室

c挑拣  如果有少量霉变粮食,可以挑拣出来扔掉,余下的快速吃掉。

黄曲霉毒素检测方法

1.一种黄曲霉毒素的检测方法,它是以单克鹿体免疫亲和柱为分离装置,用荧光 光度计为检测工具的检测方法,该方法的特征是具有以下检测过程和步骤:

A.亲和柱的准备和制备: a.制备单克鹿体,单克鹿体的制备通过小鼠免疫、细胞融合、杂交瘤筛 选及获取杂交瘤细胞株、采集单克鹿体步骤来获得,其主要步骤为: (a).小鼠免疫:以黄曲霉毒素B1(简称AFB1)和牛血清蛋白BSA的偶联 复合物为免疫原(抗原)免疫小鼠;用50ug/50ul抗原(AFB1-BSA) 与50ul弗氏完全佐剂乳化后腹腔注射每只10周龄BALB/C雄性小 鼠,一个月后进行加强免疫,腹腔注射50ug/50ul抗原与弗氏不完全 佐剂乳化后的抗原,再经过2个月后作最后一次免疫,采用尾静脉 注射剂量为50ug/50ul抗原,4天后取出小鼠的脾脏细胞,进行下一 步的细胞融合;

(b)细胞融合:免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞X63-Ag8.653以10∶1混 匀,借助50%聚乙二醇(PEG1500)进行融合,融合细胞用HAT选 择培养基于5%CO2,37℃培养箱中培养;7天后更换HT培养液, 第10天进行阳性筛选;

(c)杂交瘤筛选及获取杂交瘤细胞株:进行阳性孔筛选采用间接非竞争 酶联免疫吸附法与排除法结合的方法;将筛选得到的强阳性细胞 进行有限稀释克隆化,反复克隆多次,获得多株能稳定分泌抗黄 曲霉素AFT抗体的杂交瘤细胞株,对其中的2A12进行系统鉴定 后待用;

(d).采集单克鹿体:将上述2A12杂交瘤细胞株扩大培养后,注入预 先注射有降植烷的小鼠腹腔内,使其生长腹水瘤;10天后采集腹 水,该腹水中含有大量单克鹿体;保存好该单克鹿体备用;

b.利用上述的单克鹿体来制备免疫亲和柱,其步骤如下:

(a)称取适量溴化氰活化的的琼脂糖干粉:用1毫升1M的稀盐酸使 其溶胀,然后在烧结玻璃滤器上冲洗以除去杂质;

(b).将溶胀后的琼脂糖凝胶在偶联缓冲液中与上述制备得到得单克鹿 体均匀混合,并在室温下震荡充分反应1小时,偶联缓冲液由0.1MNaHCO3 和0.5MNaCL配成,PH值为8.3;

(c).除去未与琼脂糖凝胶结合的游离抗体;

(d).封闭琼脂糖凝胶珠上残余的活性基团,用0.1MPH值为8.0的 Tris-HCl处理偶联复合物,并静置2小时;

(e).用含有0..5MNaCl,PH值为4.0的0.1M乙酸缓冲液淋洗偶联复合 物一次,再用含有0.5MNaCl,PH值为8.0的0.1MTris-HCl缓冲液淋洗一次, 如此循环反复清洗3次;

(f).最后将琼脂糖-抗体复合物填充入55×6mm层析柱中,即制成免 疫亲和柱。平衡备用;

B.食品中黄曲霉毒素的分离与检测方法:称取适量样品,用一定比例的甲醇/水提 取其中的AFT,经过过滤步骤并进行适当稀释之后,将液体样品流经亲和柱达 到净化的目的,再用甲醇将亲和柱上的AFT洗脱下来,在洗脱液中加入溴溶液 衍生,提高检测灵敏度,然后用荧光分光光度计测定样液中黄曲霉毒素的含量。

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