7200型光栅分光光度计由光源,单色器,试样室,光电管,线性运算放大器,对数运算放大器及数字显示器等部件组成,基本结构如下所示.

1.光源;2.单色器;3.试样室;4.光电管;5.线性运算放大器;6.对数运算放大器;7.数字显示器

1.1.2 7200型分光光度计工作原理

7 2 0 0型光栅分光光度计光学系统

1.光源灯;2.滤光片;3.球面反射镜;4.入射狭缝;5.保护玻璃;6.平面反射镜;7.准直镜;8.光栅;9.保护玻璃;10.出射狭缝; 11.聚光镜;12.试样室; 13.光门;14.光电管; 

1.1.2 7200型分光光度计工作原理(文)

由光源灯(1)发出连续辐射光线,经滤光片(2)和球面反射镜(3)至单色器的入射狭缝(4)聚焦成像,光束通过入射狭缝(4)经平面反射镜(6)到准直 镜(7)产生平行光,射至光栅(8)上色散后又以准直镜(7)聚焦在出射狭缝(10)上形成一连续光谱,由出射狭缝选择射出一定波长的单色光,经聚光镜 (11)聚光后,通过试样室(12)中的测试溶液部分吸收后,光经光门(13)再照射到光电管(14)上.调整仪器,使透光度为100%,再移动试样架拉 手,使同一单色光通过测试溶液后照射到光电管上.如果被测样品有光吸收现象,光量减弱,由光电转换元件将变化的光信号转变为电信号,经线性运算放大器和对 数运算放大器处理,将光能的变化程度通过数字显示器显示出来.可根据需要直接在数字显示器上读取透光度(T),吸光度(A)或浓度(C).

1.1.3特点

(1) 具有低杂色光,高分辩率的单光束光路结构的单色器;

(2) 具有良好的稳定性,重现性和精确的测量读数;

(3) 明亮清晰的数字显示器可显示透射比,吸光度,浓度和所设置的波长,提高了仪器的读数准确性;

(4) 采用最新微机处理技术,仪器具有自动设置0%T和100%等控制功能;

(5) 仪器配有标准的RS-232双向通讯接口,不仅可向计算机发送测试参数,还可接收计算机发出的指令.

(6) 在已知标准溶液浓度前提下,测定未知样品浓度;

(7)在已知标准溶液浓度斜率前提下,测定未知样品浓度.

1.2 7200型分光光度计使用方法(基本操作 1)

1.2.1基本操作 

(1)通电---仪器自检----预热20min;

(2)用键设置测试方式:透射比(T),吸光度(A),已知标样浓度方式(C)和已知标样浓度斜率(K)方式;

(3)波长选择:用波长调节旋钮设置所需的单色光波长;

(4)放样顺序:打开样品室盖,在1~4号放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑体),参比液,样品液1和样品液2.

(5)校具(黑体)校"0.000":将%T校具(黑体)置入光路,在T方式下按"%T"键,此时仪器自动校正后显示"0.000"

(6)参比液校"100"%T或"0.000"A:将参比液拉入光路中,按"0A/100%T"键调0A/100%T,此时仪器显示"BLA",表示仪器正在自动校正,校正完毕后显示"100"%T或"0.000"A后,表示校正完毕,可以进行样品测定.

(7)样品测定:将两样品液分别拉入光路中,此时若在"T"方式下则可依次显示样品的透射比(透光度)若在"A"方式下,则显示测得的样品吸光度.

1.2 7200型分光光度计使用方法(浓度测定)

7200型分光光度仪不仅可以测定未知样品的透射比(T)和吸光度(A)这两项基本操作,还可进行未知样品浓度测定.

(1)在已知标准溶液浓度前提下,测定未知样品浓度.

(2)在已知标准溶液浓度斜率前提下,测定未知样品浓度.

备注:以上两种浓度测定的方法请大家参照实验教学教材课后自学.

1.3 7200型光栅分光光度计的使用注意事项(1) 

(1) 预热是保证仪器准确稳定的重要步骤.

(2) 比色皿的清洁程度,直接影响实验结果.因此,特别要将比色皿清洗干净.先用自来水将用过的比色皿反复冲洗,然后用蒸馏水淋洗,倒立于滤纸片上,待干后再收回比色皿盒中.必要时,还要对比色皿进行更精细的处理,如用浓或铬酸洗液浸泡,冲洗.

(3) 比色皿与分光光度计应配套使用,否则会引起较大的实验误差. 比色皿不能单个调换

1.3 7200型光栅分光光度计的使用注意事项(2)

(4) 比色皿内盛液应为其容量的2/3,过少会影响实验结果,过多易在测量过程中外溢,污染仪器. 比色皿中试样装入量应为2/3～3/4之间

(5) 拿放比色皿时,应持其"毛面",杜绝接触光路通过的"光面".如比色皿外表面有液体,应用绸布拭干,以保证光路通过时不受影响.

(6) 若待测液浓度过大,应选用短光径的比色皿,一般应使吸光度读数处于0.1～0.8范围内为宜.由于测定空白,标准和待测溶液时使用同样光径的比色皿,故不必考虑因光径变化而引起的影响.

2. UV-754型紫外-可见分光光度计正确使用方法

2.1 紫外分光光度法概述

2.2 UV-754型紫外-可见分光光度计结构和工作原理

2.1.1仪器结构

2.1.2工作原理

2.3 UV-754型紫外-可见分光光度计使用方法

2.4 UV-754型紫外-可见分光光度计使用注意事项 

2.1 紫外分光光度计法概述(1)

2.1.1定义 用紫外光源通过分光光度技术对物质进行测定的方法叫作紫外分光光度法.所使用的仪器叫作紫外分光光度计.

2.1.2原理 因为许多化合物的分子结构中存在共轭双键,在200～400nm的紫外光区具有吸收光的特性,所以无需进行显色反应便能直接测定. 

2.1.3应用 常用于对蛋白质和核酸进行定性,定量测定.蛋白质分子中所含酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸残基在波长280nm处具有最大吸收峰.故常用波长280nm处的吸光度测定蛋白质的浓度.

2.1.4特点

(1) 组成核酸的碱基也含有共轭双键,其最大吸收峰的波长在260nm处.但在280nm处也有一定的光吸收,对蛋白质的测定有一定的干扰作用.若分别测定280nm和260nm处的吸光度,可通过经验公式消除核酸对蛋白质测定的影响.

(2)可对微量蛋白质(1～10g/L)不需显色,进行直接定量测定.因此操作简便,而且可回收样品.此外,盐类在280nm处无光吸收,少量盐类也不会影响测定结果.

(3)紫外分光光度法完全符合Lambert-Beer定律的基本原理.在其它条件保持一致的情况下,被测溶液的吸光度与被测溶液的浓度成正比. 

2.2 UV-754型分光光度计的结构和工作原理

2.2.1仪器结构 由光源(钨灯或氚灯),单色器,试样室,接受器(光电管),微电流放大器,A/C 转换器,打印机,键盘和显示器等部件组成.微处理机(CPU)通过输入,输出口(I/O)对微电流放大器,显示器和打印机等部件进行 控制,实现仪器的整体功能.

2.2.2工作原理

UV-7 5 4型紫外-可见分光光度计光学系统

1.氚灯;2.钨灯;3.滤光镜;4.聚光镜;5.入射狭缝;6.平面;7.准直镜; 8.光栅; 9.出射狭缝; 10.聚光镜; 11.试样室; 12.光门; 13.光电管 

2.2.2工作原理(文)

由光源氚灯或钨灯(1或2)发出连续辐射光线经滤光镜(3)和聚光镜(4)至单色器入射狭缝(5)处聚焦成像,再经平面反射镜(6)反射至准直镜(7)产生平行光射至光栅(8)在光栅上色散后又经准直镜(7)聚焦在出射狭缝(9)上成一连续光谱,经出射狭缝射出的光在聚光镜(10)聚光后分别通过试样室 (11)中的空白溶液(或对照溶液),标准溶液或样品溶液,被部分吸收后光经光门(12)再照射到光电管(13)上.被光电管接收的光信号再被转换成电信号,后者通过输入,输出口(I/O).进入微处理机进行调零,变换对数,浓度计算以及打印数据等处理,将检测结果通过显示器和打印系统显示出来.

2.3 UV-754型分光光度计使用方法(外型)

2.3.1 UV-754型紫外可见分光光度计

1.试样架拉手;2.键盘部分;3.数据打印;4.波长刻度盘; 5.波长手轮;6.电源汗关;7.氚灯触发按钮;8.光源室.

2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘)

UV-754型紫外-可见分光光度计

键盘详细内容说明如下:

2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘内容1)

① 功能键: F1～F8,暂无功能,备扩展使用.

② T键: 具有三种透光度状态调节功能.

③ A/C键:吸光度/浓度转换键,按此键可分别表示"吸光度0～3A

④ 送入键:只在"A/C键"处于"浓度"状态时才起作用.

⑤ 打印键:手动方式时有效,每按一次,便打印一次数据.

⑥ 控制键:在分别使用"设定+一

⑦ 设定+键:在"A/C键"处于"浓度"状态时才能设定"标准浓度值

2.3 UV-754型分光光度计使用方法(键盘内容2)

⑧ 设定- 键:是使设定数值减小,操作与"设定+键"类同.

⑨ 倍率键:用来设定标准溶液浓度的放大倍数.有"1

⑩ 显示方式键:可表示"积分 

(11) 打印方式键:存在"自动"(每移动一次试样架,仪器自动打印一次数据),"方式1"(手动方式,每按一次此键,仪器打印一次数据)和"方式2"(每分钟定时打印一次数据)三种状态.每与"控制键"同时按一次此键便改变一个状态.

(12) 送纸键:每按一次此键,仪器移动一次打印纸.

(13) TAC:数字显示器显示测定结果或输入的数据. 

2.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法(1)

(1) 测试准备

① 将盛有"空白"或"对照"溶液的比色皿处于试样室光路位置;

② 选择波长 旋动波长手轮选定所需波长;

③ 确定光源 波长在200～290nm时,选择氚灯为光源;波长在290～360nm时,同时以氚灯和钨灯为光源;波长在360～850nm时,选择钨灯为光源;若使用氚灯,需按氚灯触发按钮启动;

④ 仪器自检 显示器显示"754"后,数字显示出现"100.0",表明仪器通过自检程序,此时仪器进入"0～100%

⑤ 仪器预热30min后方可进行测试. 

2.3.2 UV-754型紫外可见分光光度计使用方法(2)

(2)测试过程

① 数字显示透光度"100.0"(或吸光度"0.00")2～3s后,将盛有标准溶液的比色皿移至光路,打印系统便自动打印出所得数据; 

② 将盛有样品溶液的比色皿移至光路,打印系统即自动打印出该样品的数据.待第一个样品数据打印完毕后,将第二个样品置于试样室光路………,若有多个样品,操作以此类推.

(3)打印方式

采用"自动"方式打印,依所选定表达方式可打印出以下数据:No(编号) %T(透光度)或ABS(吸光度)或CONC(浓度)

2.4 UV—754型紫外—可见分光光度计注意事项 

(1) 预热是保证实验结果准确可靠的必要步骤,不可忽略.

(2) 在波长320nm以下的实验范围一定要选用石英比色皿,绝不可以玻璃比色皿替代.

(3) 比色皿需保持清洁,拿放时要符合要求.

(4) 对不同型号和类型的仪器要严格按照使用说明操作.

(5) UV-754型紫外-可见分光光度计还可开展"以校正线进行浓度演算"和"用已知斜率K值与B值进行浓度测定"等多种测试方法.

(6)不同蛋白质所含酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸的数量有所差异,此法对不同蛋白质洋品的测定结果有所影响下载本文