1．某生物小组试图探究以葡萄、柿子为原料制作果酒、果醋。请你回答下列问题：

(1)酵母菌的分离和纯化

①用清水冲洗葡萄1～2遍除去污物，用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入甲瓶中。葡萄汁的质量和环境温度等方面满足需求，在________________的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物则被抑制。应注意的相关操作是_____________________________

_______________________________________________。

②若要通过酵母菌的单菌落进行计数，应在培养液中加入________，采用________________法分离和计数。能用这种培养基对酵母菌进行扩大培养吗？________。

(2)柿子酒、柿子醋的制备

①将打碎的柿子浆装入发酵瓶内，若加入______________酶，则能较好地提升柿子酒的清澈度。

②当酒精发酵基本完成时，将果汁的酒精浓度稀释至5～6度，然后倒入醋酸发酵装置(装有5%～10%的醋酸菌液)，搅匀，将温度保持在30 ℃，进行醋酸静置发酵。该过程中，对装置应进行的操作是____________________________。

解析：(1)①由于果酒发酵中，发酵液缺氧且呈酸性，其他微生物受到抑制，而酵母菌可以在这样的发酵液中生长繁殖产生大量的果酒。因为酵母菌发酵需要无氧环境，但会产生CO2，以防止发酵瓶因气压过大而爆裂，应注意间隔一段时间排气。②若要通过酵母菌的单菌落进行计数，需要用固体培养基培养才能形成菌落，所以应在培养液中加入凝固剂——琼脂；分离并计数要采用稀释涂布平板法接种培养；但不能用这种方法对酵母菌进行扩大培养，因为固体培养基不能被培养的酵母菌在短时间内充分利用。(2)①发酵制作的果酒呈浑浊状态，是因为发酵液中存在大量的酵母菌不能利用的纤维素和果胶，所以可以在发酵液中加入纤维素酶和果胶酶进行分解，以提升柿子酒的清澈度。②当酒精发酵基本完成时，将果汁酒倒入含有醋酸菌液的装置中进行醋酸发酵，由于醋酸发酵需要在有氧环境中进行，所以需要对装置通入无菌空气。

答案：(1)①缺氧、呈酸性　间隔一段时间排出CO2　②琼脂　稀释涂布平板　不能　(2)①纤维素酶和果胶　②通入无菌空气

2．以下是有关泡菜制作的一些问题，请分析作答：

(1)制备泡菜的盐水中盐与清水的质量比约为________，盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)在泡菜腌制过程中经常向坛口边缘的水槽中补充水分的目的是提供________环境。在发酵初期会有气泡从坛沿水槽内的水中间歇性溢出，这些气泡来源于__________________________________________________。

(3)若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是______________________。

(4)发酵过程中会产生亚盐，亚盐在特定条件下会转变成致癌物________，所以在发酵过程中应定期测定亚盐的含量，以把握取食泡菜的最佳时机。亚盐含量的检测方法是________，在检测泡菜中亚盐含量的实验中，必须先制备已知浓度的____________，将显色反应后的样品与其进行比对。

解析：(1)制备泡菜的盐水中盐与清水的质量比约为1∶4，盐水需煮沸并冷却后才可使用，加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。(2)在泡菜腌制过程中，经常向坛口边缘的水槽中补充水分的目的是提供无氧环境。在发酵初期会有气泡从坛沿水槽内的水中间歇性溢出，这些气泡是微生物呼吸作用产生的气体和泡菜坛中剩余的空气。(3)若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能是盐过多抑制了乳酸菌发酵。(4)发酵过程中会产生亚盐，亚盐在特定条件下会转变成致癌物亚硝胺，所以在发酵过程中应定期测定亚盐的含量，以把握取食泡菜的最佳时机。亚盐含量的测定利用比色法，在检测泡菜中亚盐含量的实验中，必须先制备已知浓度的标准显色液，将显色反应后的样品与其进行比对。

答案：(1)1∶4　加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响　(2)无氧　微生物呼吸作用产生的气体和泡菜坛中剩余的空气　(3)盐过多抑制了乳酸菌发酵　(4)亚硝胺　比色法　标准显色液

3．(2019·赣州模拟)国家生活饮用水卫生标准(GB5749­2006)规定：接种1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，经37 ℃、24 h培养后，所生长出的菌落总数不得大于100。某兴趣小组对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。回答下列问题：

(1)用无菌三角瓶取水样前，取样器(玻璃制品)需通过________法灭菌。取水前的无菌操作的目的是____________________。

(2)该小组通过滤膜法测定细菌总数，将10 mL的水样进行过滤后，将滤膜放在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上培养，培养时应将平板倒置，其原因是__________________________。所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外，还能提供磷酸盐和__________。在培养过程中，不同时间所观察到的平板上菌落特征的差异有______________________________________(至少写出两点)。

(3)经过24 h培养，结果如表

(4)该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目，可将滤膜放在含有____________的培养基上，计算培养基上________(颜色)菌落的数目。

解析：(1)用无菌三角瓶取水样前，取样器(玻璃制品)需使用干热灭菌法灭菌。取水前无菌操作的目的是防止外来杂菌污染，以免干扰实验结果。(2)平板倒置后既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止冷凝水滴落培养基，造成污染，影响实验结果。所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外，还能提供磷酸盐和维生素。在培养过程中，不同时间所观察到的平板上菌落特征的差异有菌落的大小、数目、形状、颜色等。(3)表格中3个平板的平均菌落数为38个，低于国家规定的标准，因此所取水样符合饮用水的标准。(4)测定饮用水中大肠杆菌的数目的方法：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。

答案：(1)干热灭菌　防止外来杂菌污染　(2)防止冷凝水滴落污染培养基　维生素　菌落大小、数目、形状、颜色等　(3)符合　(4)伊红美蓝　黑色

4．果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁更容易，也使得浑浊的果汁变得澄清。请回答下列有关果胶酶的问题：

(1)探究温度对果胶酶活性影响的实验步骤：

a．用搅拌器制苹果泥；

b．取6个烧杯编号1、2、3、4、5、6，依次注入适量30 ℃、35 ℃、40 ℃、45 ℃、50 ℃、55 ℃的水，恒温水浴；

c．每一烧杯中放入分别装有等量苹果泥和果胶酶的试管，保温3 min；

d．向每组烧杯的苹果泥中加入相应的等量的果胶酶，振荡试管，反应一段时间；

e．过滤，比较获得苹果汁的体积。

①c中将苹果泥和果胶酶分别装在不同试管中恒温处理的目的是____________________________。

②有人认为该实验缺乏对照，应补充一组果汁和蒸馏水相混合的实验，你认为有没有必要？______________。

③若继续探究果胶酶的最适用量，则在实验过程中温度、________________(列举两条)等因素应保持不变。

(2)由霉菌发酵生产的果胶酶是食品加工业中使用量较大的酶制剂之一，若通过固定化霉菌细胞生产果胶酶，在配制海藻酸钠溶液时，要注意_____________________，否则可能出现焦糊。固定化细胞技术一般采用包埋法固定化，原因是

________________________________________________________________________。

解析：(1)探究温度对酶活性影响的实验中，温度是自变量，但为了保证实验的正常进行，必须预先达到实验要求的条件，该实验利用温度梯度作为相互对照，没必要补充果汁和蒸馏水相混合的对照实验。(2)固定化细胞技术操作时为了避免海藻酸钠溶液出现焦糊，要注意用小火或间断加热；由于细胞体积大，不易从包埋材料中漏出，所以一般采用包埋法固定霉菌细胞。

答案：(1)①保证底物和酶在混合时的温度是相同的　②没有　③pH、果胶酶浓度、果泥量(答出两条即可)　(2)加热时用小火或间断加热　细胞体积大，不易从包埋材料中漏出

5．从黄花蒿中提取的青蒿素是一种无色针状晶体，易溶于有机溶剂，难溶于水，不易挥发，高温和受潮易分解。请回答下列有关问题：

(1)提取青蒿素时，应采用萃取法而不宜用水蒸气蒸馏法，其原因是________________________________________________________________________。

(2)提取青蒿素时，最好选用的一种原料是__________(填“高温烘干”“晾干”或“新鲜”)的黄花蒿，理由是___________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)研究表明青蒿素对卡他球菌有较强的抑制效果，如图是对青蒿素敏感的卡他球菌原始菌种的相关实验(影印接种法指用无菌绒布覆盖在长有菌落的1号培养基表面，轻轻按压，不旋转绒布，然后将绒布上的菌落“复印”到2号和3号培养基上)。

①培养基配制好后，需用____________________(填仪器名称)对其进行灭菌。

②在2号培养基上挑取与3号培养基位置相同的1个菌落，接种到________(填“含”或“不含”)青蒿素的培养基上，若出现较多菌落(未受污染)，则抗青蒿素卡他球菌的出现说明相关基因突变发生在该菌接触青蒿素________(填“之前”或“之后”)。

③影印接种时需将菌种先影印到2号培养基再影印到3号培养基，不能颠倒，原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

解析：(1)根据题干信息，青蒿素不易挥发，很难随水蒸气蒸馏出来，故不宜用水蒸气蒸馏法提取青蒿素。(2)青蒿素高温和受潮易分解，若采用高温烘干的黄花蒿，烘干过程中青蒿素受高温易分解；若用新鲜的黄花蒿，含水量较高，会影响萃取的效果(萃取前一般需进行干燥)；采用晾干的黄花蒿，可避免青蒿素高温下分解，且晾干的黄花蒿含水量低，有利于用有机溶剂提取青蒿素。(3)对青蒿素敏感的卡他球菌，经稀释涂布平板法，接种到1号培养基上，长出菌落后，用影印接种法接种到2号和3号培养基上，影印接种法可保证2号和3号培养基相同位置上长出相同的菌落。①培养基配制好后，需用高压蒸汽灭菌锅对其进行灭菌。②在2号培养基上挑取与3号培养基位置相同的1个菌落，若接种到不含青蒿素的培养基上，长出较多菌落，不能说明任何问题，若接种到含青蒿素的培养基上，长出较多菌落(未受污染)，则说明这些卡他球菌在接触青蒿素之前对青蒿素已经产生了抗性(抗性的产生是相关基因突变的结果)。③影印接种时需将菌种先影印到2号培养基再影印到3号培养基，不能颠倒，因为2号培养基不含青蒿素，3号培养基含有青蒿素，若操作颠倒，先影印到3号培养基，大量卡他球菌会被青蒿素杀死，导致2号和3号培养基上的菌落都是抗青蒿素的菌株，进而导致结果不准确。

答案：(1)青蒿素不易挥发，很难随水蒸气蒸馏出来(合理即可)　(2)晾干　青蒿素高温和受潮易分解，晾干过程避免了青蒿素高温下分解，且晾干的黄花蒿含水量低，用有机溶剂萃取青蒿素的效果好(合理即可)　(3)①高压蒸汽灭菌锅　②含　之前　③若先影印到3号培养基，青蒿素会杀死大量卡他球菌，导致2号和3号培养基上的菌落都是抗青蒿素的菌株，进而导致结果不准确(合理即可)下载本文