一、项目名称
Kinesin家族成员肿瘤侵袭转移的分子机制研究
二、申报奖种
山东省科技进步奖
三、申报单位
青岛大学山东大学齐鲁医院山东大学
四、推荐单位意见
该项目阐述了沉默Kif2a对Tca8113细胞增殖和侵袭转移能力的影响，揭示沉默Kif2a对舌癌增殖及侵袭转移的抑制作用并阐述了沉默Kif2a通过Rho/ROCK信号转导通路肿瘤细胞侵袭转移的机制，为以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗提供新型靶分子和理论依据。立项新颖，具有创新性，课题按时顺利完成，达到预期研究目标，并发表相关SCI论文多篇，建议推荐申报科技进步奖。
五、项目简介
1、首先在原有研究结果基础上，通过MTT实验、克隆生成实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell小室实验观察了Kif2a基因沉默对舌癌细胞Tca8113细胞增殖及侵袭迁移能力的影响。结果显示，Kif2a基因沉默能显著抑制舌癌的增殖和侵袭转移能力。进一步研究了临床常用化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）与Kif2a 基因沉默对裸鼠移植瘤生长的协同抑制效应，Kif2a基因沉默能显著增强5-Fu 对Tca8113细胞的增殖抑制效应,增加Tca8113细胞对5-Fu的药物敏感性。
2、构建细胞移植瘤裸鼠模型。活体、实时观察Kif2a基因沉默对裸鼠移植瘤生长的作用，记录裸鼠生存期并绘制生存曲线。结果显示Kif2a基因沉默显著抑制裸鼠移植瘤的生长。
3、Real time RT-PCR及Western blot技术检测空白对照组、阴性对照组及Kif2a 干扰组细胞内Rho家族成员RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42基因的表达情况。结果发现，与阴性对照组比较，Kif2a干扰组细胞内RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42的基因表达水平显著下降。
4、应用Rho/ROCK信号通路特异性抑制剂LY-27632和激动剂溶血磷脂酸LPA，人工划痕实验及transewll小室显示Kif2a基因沉默抑制Tca8113细胞迁移，表明Kif2a可能通过RhoA/ROCK信号通路细胞的迁移能力。
5、Kif2a干扰组细胞中PI3K、Akt及Bcl-2基因mRNA及蛋白的表达水平均显著降低，而Bax基因的mRNA及蛋白表达水平显著升高，由此推测Kif2a基因沉默可能通过PI3K/Akt信号通路相关分子影响细胞的凋亡，特别是通过Bcl-2/Bax的比值。
6、构建稳定敲除Kif2a基因的Tca8113细胞裸鼠转移瘤模型，并采用免疫组化染色方法检测转移瘤组织内RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42等蛋白表达的变化。结果显示Kif2a基因沉默显著抑制RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42的表达，表明Kif2a 基因沉默抑制Tca8113细胞的侵袭转移能力，这一作用可能是通过Rho/ROCK1信号通路而实现的。
本研究首次阐述舌鳞癌中Kif2a基因沉默对细胞侵袭转移能力的影响。该研究结果将丰富Kif2a的研究，并为口腔肿瘤抗转移治疗提供新的思路及理论依据。首次阐述Kif2a可能通过自身解聚微管改变细胞骨架，并通过Rho蛋白家族及Rho/ROCK信号转导通路肿瘤侵袭转移的分子机制，为舌癌筛选以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗的新型靶分子提供重要的线索和理论依据。
六、客观评价：该项目阐述了沉默Kif2a对Tca8113及SAS细胞增殖和侵袭转移能力的影响，揭示沉默Kif2a对舌癌增殖及侵袭转移的抑制作用并阐述了沉默Kif2a通过Rho/ROCK信号转导通路肿瘤细胞侵袭转移的机制，为以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗提供新型靶分子和理论依据。立项新颖，具有创新性，课题按时顺利完成，达到预期研究目标，并发表相关SCI论文多篇，具有较高的临床意义。
七、推广应用情况：
项目应用单位名称：青岛大学附属医院
应用单位注册地址：青岛市市南区江苏路16号
应用起止时间：2013-2015年
具体应用情况：主要用于口腔肿瘤标志物的检测，并免疫组化检测口腔癌原发灶及淋巴结内转移灶中Kif2a的表达，用于肿瘤分期及预后判断。
主要知识产权证明目录：
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九、主要完成人情况表
1、王成勤第一完成人青岛大学医学院病理教研室讲师
对本项目技术创造性贡献：作为项目主持人全面负责项目中全部实验技术的具体实施。熟练掌握本研究所需的免疫组化技术及PCR、Western blot、载体构建、细胞培养、基因转染、稳定转染细胞株筛选等技术。2014-2015年于美国M.D.Anderson癌症中心从事乳腺癌转移机制研究。主持国家自然基金1项。第一作者发表SCI收录论文6篇，最高影响因子5.6分。兼任中国医学促进会委员，青岛市医学会病理分会委员。
2.王建丽，第二完成人，山东大学医学院副教授，硕士研究生导师。山东省病理生理学会肿瘤专业主任委员，中国动脉硬化杂志编委。2007-2008年在美国Rochester大学医学中心病理学系从事乳腺癌诊断及转移机制研究。主持山东省卫生厅科研项目1项，山东省自然基金一项，参与国家自然基金和山东省自然科学基金各4项，发表论文十余篇，第一作者和通讯作者发表SCI收录论文9篇。本项目中主要负责细胞功能检测。
3.王克涛，博士，山东大学齐鲁医院副主任医师。本项目中主要负责细胞培养及转染技术。擅长口腔肿瘤的诊断和治疗。第一作者发表SCI收录论文1篇。
4.迟菁华，博士，青岛大学医学院病理教研室，讲师，本项目中负责动物实验。2011年获日本福井大学医学部博士学位，兼任中华医学会病理学会青岛市分会委员。目前主要从事肿瘤厌食机制相关研究。在2005至2011年赴日留学期间，接受了严格的科研训练，熟练掌握免疫荧光多重标记、活细胞工作站、激光共聚焦显微镜等技术。主持留学归国人员科研启动基金一项。第一作者发表SCI收录论文2篇。
5.王文宏，博士，青岛大学医学院病理教研室讲师，本项目中主要从事数据统计及论文撰写。已发表核心期刊收录论文多篇。
十、主要完成单位及创新推广贡献
1、青岛大学：项目第一完成单位，负责总体技术方案制定、可行性分析、技术路线确定及技术方案的实施。
2、山东大学齐鲁医院：项目第二完成单位，负责前期舌癌病例及标本收集、病例确定及项目推广使用。
3、山东大学：项目第三完成单位，负责乳腺癌标本收集、病例确定及项目推广使用。
十一、完成人合作关系说明：本项目所有完成人均为青岛大学医学院、山东大学医学院及齐鲁医院正式职工，在本项目实施过程中团结合作，保证了项目的顺利进行。王成勤系青岛大学医学院讲师，作为项目主持人，全面负责项目中全部实验技术的具体实施。王建丽系山东大学病理生理教研室副教授，本项目中主要负责细胞功能检测。王克涛系山东大学齐鲁医院口腔科副主任医师，本项目中主要负责细胞培养及转染技术。迟菁华系青岛大学医学院讲师，本项目中负责动物实验及相关检测。王文宏系青岛大学医学院讲师，本项目中负责数据统计及论文撰写。
联系人：周敬馨
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