江苏苏酒集团股份有限公司企业标准

                                      QJ/SJ05·01—2011

曲质检验方法

2011—XX—XX批准                        2011—XX—XX实施

     江苏苏酒集团股份有限公司               发布

曲质检验方法

1 主题内容与应用范围

本标准规定了取样方法、曲质的感官检验和理化指标的检验方法。

本标准适用于本企业的曲质检验。

2 取样方法

2.1  成熟曲以排为批量，贮存曲以库为批量，制曲部门应保证产品质量，质量部必须按本标准逐项检验，不合格产品不得投入使用。

2.2  生产环保部在使用曲时，如对曲质有疑问，可以申请质量部对曲抽样复检，如不符合本标准，可以拒绝投入生产。

2.3  抽取样品时，在每房的四角及中间的上、中、下，抽取100块，在100块中抽取10块，每库随机抽取若干块，进行感观检验和理化检验。

2.4 粉碎方法：将所取的样品曲，用粉碎机粉碎。筛孔φ1mm。

2.5 四分法（通常样品需要量500g）

2.5.1混匀：将粉碎后的全部样品倒在光滑平坦的玻璃板上，用长直尺将样品摊成正方形，然后从样品左右两边铲起样品约10cm高，对准中心同时倒落，再换一个方向同样操作（中心点不动），如此反复4－5次。

2.5.2缩分：将混合均匀的样品摊成等厚的正方形，用长直尺在样品上划二条对角线，分成四个三角形，去掉二个对顶三角形的样品，余下的样品按上述方法反复分取，直到接近所需试样质量时为止。

2.5.3贮存：缩分后的样品，保存于磨口瓶中。样品在分析前，应使其达到室温后再开启，以免在大气中吸收水分。

3 曲质的检验

3.1 感官检验

检查曲块表面、断面及香味(见QJ/XYJ04.14）。

3.2 水份测定

3.2.1仪器

3.2.1.1表面皿

3.2.1.2天平

3.2.1.3干燥器

3.2.1.4干燥箱

3.2.2 测定方法

3.2.2.1取表面皿洗净，烘干，放在干燥器中，待冷却至室温，称重。

3.2.2.2抽样取曲。

3.2.2.3把试样放在已恒重的表面皿中，称重W1（准确到0.001g）。

3.2.2.4将干燥箱温度调至130℃，温度恒定后放入试样，烘烤45min。

3.2.2.5取出，放置于干燥器中冷却至室温，称重W（准确到0.001g）。

3.2.3计算

     水份(%)＝(W-W0)×100/(W1-W0)

式中：W0——表面皿重，g。

      W1——烘前试样与表面皿重，g。

      W——烘后试样与表面皿重，g。

3.3 酸度的检验

酸度定义：10g曲消耗0.1mol/L的氢氧化钠溶液的mL数，单位：mmol/10g曲。

3.3.1试剂

3.3.1.1 1%酚酞指示剂：配制方法按QJ/XYJ05·04标准中9.3条款执行。

3.3.1.2 0.1mol/L的氢氧化钠溶液配制及标定

 a.将氢氧化钠配成饱和溶液，注于塑料桶中，密闭放置至溶液清亮。使用前以塑料管虹吸上层清液。

 b.量取5mL氢氧化钠饱和溶液，注于1000mL不含二氧化碳的水中，摇匀。

c.称取0.6g于105～110℃烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，准确称至0.0002g，溶于50mL不含二氧化碳的水中，加2滴1%酚酞试液，用0.1N氢氧化钠溶液滴定至溶液所呈粉红色与标准色相同，同时作空白试验。

   注：标准色配制。量取80mLpH8.5的缓冲液，加2滴1%的酚酞指示液摇匀。

d.计算 C＝M／[(V1-V2)×0.2042]

式中： C——氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，mol/L

       M——邻苯二甲酸氢钾之重量，g。

       V1——氢氧化钠溶液之用量；mL。

       V2——空白试验氢氧化钠溶液用量mL。

      0.2042——与1.00mL氢氧化钠标准溶液(1.000mol/L)相当的以克表示的邻苯二甲酸氢钾的质量。

3.3.2 试样的处理

3.3.2.1 称取5.0g曲（以绝干曲计），置入250mL烧杯中。

3.3.2.2 加100mL水，摇匀，于室温下浸泡30min，经常搅拌。

3.3.2.3 用滤纸过滤，滤液备用。

3.3.3 检测

3.3.3.1 吸取滤液10mL，置入150mL三角瓶中。

3.3.3.2 加约20mL水、2滴1%酚酞指示剂，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液滴定至微红色。

3.3.4 计算

酸度＝CV×（ 100/10） × （10/5） 

  式中：C——氢氧化钠溶液的摩尔浓度，mol/L。

        V——消耗氢氧化钠溶液体积，mL。

       100/10——100mL浸出液吸取10mL浸出液。

       10/5——5g曲换算成10g曲。

3.4 曲糖化酶活力（糖化力）检测

3.4.1 试剂

3.4.1.1 斐林氏溶液

甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）、0.05g次甲基蓝，溶解于水，稀释至1L。

乙液：称取50g酒石酸甲钠，54g氢氧化钠，4g亚铁，溶解于水，称释至1L。

3.4.1.2 0.1%标准葡萄糖溶液

称取预先在100~105℃烘干的无水葡萄糖1.0g（用减量法快速称量，精确到0.0002g），溶解于水，加5mL浓盐酸，用水定溶至1L。

3.4.1.3 2%可溶性淀粉溶液

用分析天平准确称取干燥除去水分的淀粉2g （精确到0.001g），于50mL烧杯中用少量水调匀后，倒入盛有70mL沸水的150mL烧杯中，并用20mL水分次洗净50mL小烧杯，洗液合并其中，用微火煮沸到透明，冷却后用水定容至100mL，当天配制应用。

3.4.1.4 醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH4.6）

 a、2mol/L醋酸  118mL冰醋酸用水稀释至1L。

 b、2mol/L醋酸钠 称取醋酸钠（CH3COONa ·3H2O）272g溶于水，稀释至1L。

 c、将a，b两溶液等体积混合，即为pH4.6的缓冲液。

3.4.1.5 1mol/L氢氧化钠溶液

称取40g氢氧化钠，溶于水，稀释至1L。

3.4.2 5%曲子浸出液制备

称取相当于5.0g绝干曲的曲粉，放在250mL烧杯中，加水（90-5×水份%）mL，缓冲液10mL，在30℃水浴中浸出1h，每隔15min搅拌一次。然后用干滤纸过滤，弃去最初5mL，接收50mL澄清滤液备用。

3.4.3 糖化力测试液制备

3.4.3.1 曲子浸出液的糖化试液

准确吸取2%可溶性淀粉50mL于100mL容量瓶中，在35℃水浴中保温20min后，准确加入浸出液 10mL，摇匀并开始计时，在35℃水浴中保温1h。立即加入3mL1mol/L的氢氧化钠，振荡，以停止反应，再冷却至室温。用蒸馏水定容至刻度，此时溶液应呈碱性。

3.4.3.2 空白试验液

准确吸取2%可溶性淀粉50mL于100mL容量瓶中，先加入1mol/L氢氧化钠3mL，混合均匀后再加酶浸出液10mL，用蒸馏水定容、摇匀。

3.4.4 糖分测定

3.4.4.1 糖化液测定                               

准确吸取5mL糖化液于盛有斐林氏甲、乙液各5mL的150mL三角瓶中，加入适量0.1%标准葡萄糖 溶液，摇匀，在电炉上加热至沸后，立即用标准葡萄糖滴定至蓝色消失。此滴定应在1min内完成，滴定消耗葡萄糖体积V。

3.4.4.2 空白液测定

   以5mL空白液代替糖化试液，其它操作同上，消耗体积V0。

3.4.5 计算               

     糖化酶活力=           ×1000  

 上面公式错误，改为（糖化酶活力）=

式中：V0——5mL空白液消耗0.1%标准葡萄糖液的体积（mL）

      V ——5mL糖化液消耗0.1%标准葡萄糖液的体积（mL）

      p—— 标准葡萄糖溶淮浓度（g/mL）    

      5×10/100   ——5g干曲浸出后在100mL中取10mL进行糖化试验    

      5/100      ——在100mL糖化液中取5mL定糖

      1000 ——换算成mg

糖化酶活力——1g干曲在35度pH4.6条件下反应1h，将可溶性淀粉分解为葡萄糖的mg数（u/g）     

3.5 大曲发酵力的检测

3.5.1 仪器

3.5.1.1 发酵瓶

3.5.1.2 蒸气灭菌锅

3.5.1.3 工业天平

3.5.2 试剂和溶液

3.5.2.1 硫酸溶液 5mol/L（1/2H2SO4）。取14mL浓硫酸，边搅拌边缓慢加入50mL水中，用水稀释至100mL，不必标定。

3.5.2.2 0.1mol/L（1/2I2）。不用标定。

3.5.3 曲糖化液的制作

3.5.3.1 制作糖液

取生曲面（或大米）500g ，加水2500mL（原料：水=1：5~6），混匀，蒸煮至淀粉充分糊化，冷却至60℃，加糖化酶糖化，加入糖化酶5万单位量为：原料：糖化酶=500：2~10，在60℃糖化3~4h，碘液测定糖液是否糖化完全。具体做法是：取一滴碘液于白瓷板中，滴加一滴糖化液，如碘液不变色，即此糖化液已糖化完全。

3.5.3.2 糖液灭菌

   糖化好的糖液用四层纱布过滤，所滤清液在室温下调糖度至13。BX，分装灭菌。

3.5.4 试验

3.5.4.1 量取13。BX浓度的曲糖化液150mL，加入到250mL的发酵瓶中，塞上棉花塞，包好油纸，记下液面高度，用油纸包好发酵栓，二者同时放入蒸气灭菌锅中在0.1MPa下，灭菌30min。

3.5.4.2 冷却至25℃左右，在无菌条件下，接入粉碎大曲粉1.00g在发酵栓中，量入5mol/LH2SO4(1/2H2SO4)硫酸10mL。

3.5.2.3 用石腊封发酵瓶塞，用抹布擦干瓶外塞壁，置瓶于千分之一感量的工业天平上称量，记下读数。

3.5.4.4 将发酵瓶置于25℃保温箱中，发酵48h。

3.5.4.5 取出发酵瓶，轻轻摇动发酵瓶使二氧化碳尽量逸出，称重，读出读数。

3.5.5计算

       发酵力（以CO2的质量分数计g/10g）= 

   式中：W1——发酵前发酵瓶重，g。

          W2——发酵后发酵瓶重，g。

          W——接入的大曲粉量，g。

3.6液化型淀粉酶活力(液化力)的测定方法

3.6.1原理

液化型淀粉酶能将淀粉水解成糊精，以及少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝色特异反应逐渐消失，以该颜色消失的速度计算酶活力。

3.6.2试剂

3.6.2.1 原碘液　称取碘11g，碘化钾22g，先用少量蒸馏水使碘完全水解后定容至500mL，贮于棕色瓶内。

3.6.2.2 稀碘液　取原碘液2mL，加入KI20g，用蒸馏水溶解定容至500mL，贮于棕色瓶内。

3.6.2.3  2%可溶性淀粉　精确称取可溶性淀粉（以绝干计）2.000g，然后用少量的蒸馏水调匀，徐徐地倾于煮沸的蒸馏水中，加热煮沸至透明为止，冷却定容至100mL。此溶液需当天配制。

3.6.2.4 0.2M醋酸－醋酸钠缓冲溶液（pH4.6）

醋酸溶液：吸取冰醋酸11.8mL，加水定容至1000mL

醋酸钠溶液：称取醋酸钠27.2g，加水定容至1000mL

将醋酸溶液及醋酸钠溶液等体积混合即为pH4.6的缓冲溶液。

3.6.3 检测步骤

3.6.3.1 待测酶液的制备：称取5.0g绝干重的粉碎试样，加水90mL，加醋酸－醋酸钠缓冲溶液10mL，在30℃浸泡1h（每隔15分钟搅拌一次），用滤纸或脱脂棉过滤取滤液备用。

3.6.3.2 测定：取20mL（改为5ml）2%可溶性淀粉和5mL(改为1.25ml)pH4.6的醋酸－醋酸钠缓冲溶液，放于20*200mm大试管中，在60℃恒温水浴中预热4－5分钟，然后加入预先稀释好的酶液10mL立即记录时间，充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.5mL滴于预先充满比色稀碘液（约1.5mL）的磁板空穴内，当穴内颜色反应由紫色逐渐变红棕色，与标准终点色相同时，即为反应终点，并准确记录时间t。

3.6.4计算

1g曲粉在60℃pH6.0的条件下，用一小时液化可溶性淀粉的克数表示。（g可溶性淀粉/g.h ）

酶活力单位＝(20×2%×n)÷10÷t×60

式中：60－60min

  20－可溶性淀粉的毫升数

　n-稀释倍数

　t-测定记录时间（min）

  2%-淀粉浓度

　10－测定时的用酶量

3.7 酯分解力测定

3.7.1试剂和溶液

3.7.1.1  pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液  

① 2mol/L醋酸  118mL冰醋酸用水稀释至1L。

② 2mol/L醋酸钠  称取醋醋钠（CH3COOHNa·3H2O）272g溶于水，稀释至1L。

将①、②两溶液等体积混合，即为pH4.6的缓冲液。

3.7.1.2  100mg/100mL己酸乙酯的20％（体积分数）乙醇溶液。

3.7.2 测定方法

3.7.2.1酯解  吸取100mL己酸乙酯溶液于500mL三角瓶中，加入相当于5g干曲的曲粉和10mL pH4.6缓冲液。加盖，在30~32℃保温反应100h （改为72h），加水40mL，蒸出100mL.酯含量的测定同酯化力测定方法。（把黄色部分去掉）

同时做空白试验，在100mL己酸乙酯中加入同量曲粉和缓冲液后立即加水40mL。蒸出100mL测酯含量。

3.7.2.2测酯  试样蒸出液和空白蒸出液各吸取50mL，分别注入250mL三角瓶中，测定方法同酯化力的酯含量测定。（把黄色部分去掉改为：加入2-3滴酚酞，用0.1mol/L的NaOH溶液中和至微红后，再加入25ml 0.1mol/L的NaOH。沸水裕中冷凝回流30分钟，冷凝后用0.1（H2SO4）mol/L的H2SO4滴定。）

3.7.3 计算

试样酯含量（mg/g）= [（V1C1—V2C2）×0.144×1000 ] / （m× 50/100）

空白液酯含量（mg/g）=  [（V1C1—V0C2）×0.144×1000 ] / （m× 50/100）

式中：    C1 ，C2 — 分别为NaOH和H2SO4标准溶液的浓度（mol/L）

                V1 — 加入NaOH标准溶液的体积（mL）

                V2 — 滴定试样消耗H2SO4标准溶液的体积（mL）

                V0 — 滴定空白消耗H2SO4标准溶液的体积（mL）

                 m — 相当5g干曲的曲粉质量（g）

           50/100 — 试样分取倍数

           1000 — 换算成mg

酯分解率（％）=（空白酯含量-试样酯含量）/空白酯含量  ×100

3.8酸性蛋白酶活力的试验方法

3.8.1定义

1g固体酶粉（或1mL酶液），在一定的温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为1个酶活单位，以u/g(u/mL)表示。

3.8.2福林法

3.8.2.1 原理

蛋白酶在一定的温度和pH值条件下，水解酪素底物，产生含有酚基的氨基酸，在碱性条件下，将福林试剂还原，生成钼蓝与钨蓝，用分光光度法测定，计算其酶活力。

3.8.2.2 试剂和溶液

3.8.2.2.1碳酸钠溶液c=0.4mol/L

   称取无水碳酸钠42.4g，用水溶解并定容至1000mL。

3.8.2.2.2  三氯乙酸c=0.4mol/L

   称取三氯乙酸65.4g,用水溶解并定容至1000mL

3.8.2.2.3缓冲溶液（需用pH计较正）

　 乳酸缓冲液（pH=3.0）适用于酸性蛋白酶

　 甲液　　称取乳酸（80%－90%）10.6g，加水溶解并定容至1000mL。

　 乙液　　称取乳酸钠（70%）16g，加水溶解并定容至1000mL。

　使用溶液　　取甲液8mL，加乙液1mL，混匀，稀释1倍，即成0.05mol/L乳酸缓冲溶液。

3.8.2.2.4　10g/L酪素溶液

　 称取酪素1.000g，精确至0.001g，用浓乳酸2－3滴湿润后，加入80mL乳酸缓冲溶液，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100mL容量瓶中，用乳酸缓冲液定容至刻度。此溶液在冰箱内贮存，有效期为3天。

3.8.2.2.5 100ug/mL酪氨酸标准溶液

　 a.称取预先于105℃干燥至怛重的L－酪氨酸0.1000g，精确至0.0002g，用1mol/L盐酸60mL溶解后定容至100mL，即为1mg/mL酪氨酸标准溶液。

（注：酪氨酸采用上海长江生化制药厂生产。）

　 b.吸取1mg/mL酪氨酸标准溶液10.00mL，用0.1mol/L盐酸定容至100mL，即得到100ug/mL L－酪氨酸标准溶液。

3.8.3　仪器和设备

3.8.3.1　恒温水浴（40±0.2）℃。

3.8.3.2 分光光度计　　

3.8.4 分析步骤

3.8.4.1标准曲线的绘制

a.L-酪氨酸标准溶液

根据作图或回归方程，计算出当吸光度为1时的酪氨酸的量（ug），即为吸光常数K值。其K值应在95－100范围内。

3.8.5 测定

3.8.5.1 固体曲浸出液的制备

根据测得的试样水份，计算10.00g绝干固体曲的试样量。称取该量试样，置于250mL烧杯中，根据试样水份计算应加水量，将水温调至30℃，加入烧杯中。再加入10.0mL醋酸－醋酸钠缓冲溶液，使固体曲的试样按绝干物质计为10.00g/100mL，充分搅匀，置烧杯于35℃恒温水浴中保温60min，保温期间每隔15min搅拌一次。浸出液用脱脂棉或多层纱布过滤。滤液应尽快测定，不宜放置。如果在1h内无法测定，可将浸出液暂置冰箱中冷藏，测定时应升至35℃后使用。（稀释至被试液吸光度值在0.25－0.40范围内）。

3.8.5.2 测定

　 a.先将酪氨素溶液放入（40±0.2）℃恒温水浴中，预热5min。

　 b.按下列程序操作：

试管A（空白）　　　　　　　　　　　　试管B（酶试样，需做3个平行试样）

　　↓　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓

加酶液1.00mL                         加酶液1.00mL

    ↓（40±0.2）℃,2min　　　　　　　　　↓（40±0.2）℃,2min

加三氯乙酸2.00mL（摇匀）　　　　　　 加酪素1.00（摇匀）

　　↓（40±0.2）℃,10min　　　　　　　　 ↓（40±0.2）℃,10min

加酪素1.00（摇匀）　　　　　　　　　 加三氯乙酸2.00mL（摇匀）

　　↓　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓

取出静止10min，过滤　　　　　　　　  取出静止10min，过滤

    ↓                                    ↓   

取1.00mL滤液                         取1.00mL滤液

    ↓                                    ↓

加碳酸钠溶液5.0mL                     加碳酸钠溶液5.0mL

    ↓                                    ↓

加福林试剂1.00mL                      加福林试剂1.00mL

    ↓（40±0.2）℃ 显色                  ↓（40±0.2）℃显色

于680nm波长，用10mmm比色皿　　　　　于680nm波长，用10mmm比色皿

测其吸光度　　　　　　　　　　　　　　测其吸光度

3.8.5.3计算

X＝A×K×4/10×n=2/5×A×K×n

式中：　X—样品的酶活力（u/g或u/mL）

A—样品平行试验的平均吸光度

K—吸光常数

4—反应试剂的总体积（mL）

10—反应时间10min，以1min计

N—稀释倍数

3.8.5.4结果的允许差

平行试验相对误差不得超过3%。

3.9 细菌的测定

3.9.1 实验材料

3.9.1.1培养基:

牛肉膏              0.5%        氯化钠         0.5%

蛋白胨              1.0%        葡萄糖         1.0%

琼脂                1.8～2.0% 

调PH至7.2～7.4后再灭菌.

3.9.1.2 主要设备:

超净工作台    一台            恒温培养箱       一台

3.9.2  实验方法

3.9.2.1 分离样品

系列稀释:称取2克曲粉,置于250mL三角瓶中,加入100mL生理盐水(或蒸馏水),搅拌成悬浮液,取悬浮液0.5mL,用生理盐水稀释到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7七个稀释度.

3.9.2.2倾注平板:

取培养皿若干,编号,然后将熔化、冷却到50-55℃的培养基倒入皿内.

培养基凝固后, 选适宜的稀释度,从中吸取0.2mL悬浮液,加入空皿中,用涂玻棒涂匀,将培养皿置于恒温培养箱,于30℃下培养2天.

3.9.2.3 计数

取出培养皿,算出3个平皿上同一稀释度的菌落平均数.计数可用记号笔在培养皿背面每数一菌落点一标记,以免计算重复或漏数,也可采用菌落计数器.用标记的方法计算菌落数,可按下列公式进行计算.

每mL菌液中的总活菌数等于同一稀释度3副重复的培养皿的菌落平均数乘以稀释倍数再乘以5(5为每皿0.2mL化成1mL的系数).

3个稀释度的平均差应是1:10:100的比例,实际操作中应尽量达到这个要求,当然每一稀释度的3副皿更应相近或一致.在这3个稀释度中,要求按30～300个菌落/皿的稀释度来正确计数,如这3个稀释度均不能满足,则应将相应的稀释度前后相应移动.

3.10 霉菌与酵母菌的测定

3.10.1  实验材料 

3.10.1.1培养基:

马铃薯(去皮)         200克          水      1000mL

葡萄糖               2%            琼脂    2%

将马铃薯洗净、去皮,称取200克,切成小块,加1000 mL水煮沸半小时,冷却后,用双层纱布滤成清夜,加水补充因蒸发而减少的水分.

3.10.1.2主要设备:

超净工作台    一台            恒温培养箱       一台

3.10.2实验方法

3.10.2.1 分离样品

系列稀释:称取2克曲粉,置于250mL三角瓶中,加入100mL生理盐水(或蒸馏水),搅拌成悬浮液,取悬浮液0.5mL,用生理盐水稀释到10－1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7七个稀释度.

3.10.2.2 倾注平板:

取培养皿若干,编号, 选适宜的稀释度,从中吸取0.2mL悬浮液,加入空皿中,然后将熔化、冷却到50-55℃的培养基倒入皿内.

培养基凝固后,将培养皿倒置于恒温培养箱,在30℃下培养2天.

3.10.3 计数

取出培养皿,算出3个平皿上同一稀释度的菌落平均数.计数可用记号笔在培养皿背面每数一菌落点一标记,以免计算重复或漏数,也可采用菌落计数器.用标记的方法计算菌落数,可按下列公式进行计算.

每mL菌液中的总活菌数等于同一稀释度3副重复的培养皿的菌落平均数乘以稀释倍数再乘以5(5为每皿0.2mL化成1mL的系数).

3个稀释度的平均差应是1:10:100的比例,实际操作中应尽量达到这个要求,当然每一稀释度的3副皿更应相近或一致.在这3个稀释度中,要求按30～300个菌落/皿的稀释度来正确计数,如这3个稀释度均不能满足,则应将相应的稀释度前后相应移动.

3.11粗淀粉测定

3.11.1 原理

淀粉经酸水解生成葡萄糖，用斐林试剂测定生成的糖。

3.11.2 试剂和溶液

1、20%HCl(质量比)

体积比1/1　　

2、甲基红　1g/L  称取甲基红0.1g溶于乙醇并稀释至100ml　　

3、甲液：称取CuSO45H2O  150g及次甲基蓝0.05g，加水溶解至1000ml，摇匀备用。

乙液：称取酒石酸钾钠50g，氢氧化钠54g，亚铁氢化钾4g，加水定容至1000ml，摇匀备用。

4、1g/L葡萄糖标准溶液，称取经103℃－105℃烘干到恒重的无水萄糖糖1.0000g ，加水溶解，并加浓盐酸5ml，用水定溶至1000ml摇匀备用。

5、20%NaOH：称取NaOH 20g ,溶解稀释至100ml，（用于调PH值）。

6、测定：

① 称5.000g曲粉，放入250ml的三角瓶中，加100mL20%盐酸，加玻璃珠，在沸水浴中冷凝回流30min，冷却后，用20%NaO中和后，用脱脂棉过滤至500ml容量瓶，洗涤，均并入容量瓶。

② 预滴定：准确吸取甲液、乙液各5ml，以及水解液1ml,于150ml三角瓶中，摇匀后在电炉上加热至沸腾，用葡萄糖标准溶液滴定至终点。

③ 滴定（需做平行样）：准确吸取甲液、乙液各5ml，以及水解液1ml,于150ml三角瓶中，加入比预滴定少0.5ml的葡萄糖，摇匀后在电炉上加热至沸腾，继续用葡萄糖标准溶液滴定至终点。记录消耗葡萄糖溶液的体积，接近终点时，滴入的葡萄糖标准溶液的用量应在0.5ml-1ml。

④ 空白试验（配制甲、乙斐林试剂时已做好）：准确吸取甲液、乙液各5ml于100ml三角瓶中，加入葡萄糖标准溶液9ml，混合后置于电炉上加热，在2分钟内沸腾，然后以4－5s一滴的速度滴入葡萄糖标准溶液，滴定至终点。（V空白在10ml左右）

3.11.3计算：

粗淀粉含量(%)=

式中：V0—空白试验时消耗葡萄糖标准溶液的体积，L.

      V—试验测定时消耗葡萄糖标准溶液的体积，L.

      C--葡萄糖标准溶液的浓度，g/L。

      N—试样水解过滤后定容的体积　ml

　　　1－滴定时的取样量

　    0.9-葡萄糖换算成淀粉的系数

　　　m—试样质量（g）

3.12大曲酯化率（力）测定

3.13.1 溶液配制：

1、乙醇庚烷溶液　量取3.5ml无水乙醇溶于100ml正庚烷溶液中，配制成1.44mol/L的乙醇庚烷溶液。

2、己酸庚烷溶液　量取7.6ml己酸溶于100ml正庚烷中，配制成1.2mol/L的己酸庚烷溶液。

3.12.2酯化率测定：

样品：分别吸取5ml乙醇庚烷和己酸庚烷溶液，置于100ml具塞磨口瓶中，加入一定量的干燥大曲（称取0.8g绝干曲粉），摇匀后置于30℃恒温摇床上，72小时后取反应液100uL加入到5ml水溶液中，用0.025mol/L的NaOH滴定未反应的己酸，以两滴1%酚酞为指示剂，消耗的NaOH量定为Vt。

空白：分别吸取5ml乙醇庚烷和己酸庚烷溶液，置于100ml具塞磨口瓶中，置于30℃恒温摇床上，72小时后取反应液100uL加入到5ml水溶液中，用0.025mol/L的NaOH滴定未反应的己酸，以两滴1%酚酞为指示剂，消耗的NaOH量定为Vo　。

酯化率＝

加说明

    本标准由江苏洋河酒厂股份有限公司标准化委员会提出。

    本标准由江苏洋河酒厂股份有限公司技术中心组织起草。

    本标准主要起草人：范文来 傅宏兵  陈 红  张晋玲 下载本文