●1，原理：MTT被活细胞线粒体水解酶还原为不溶性FMZ，而死细胞没有这种能力。沉积在活细胞内的FMZ用DMSO溶解后，溶液颜色与活细胞数量成正比。
●2，方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80μL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20μL待测样品，继续培养1天后每孔加入5mg/mLMTT20μL，在37°C培养4小时，每孔加入DMSO100μL，15分钟后用酶标仪在595NM波长下测各孔OD值，计算得出样品浓度IC50以及发酵液稀释倍数ID50。
MTT0.5g溶解在100mLPBS溶液，终浓度为5mg/mL
SRB
●1，原理：SRB是一种蛋白质结合染料，能使使活细胞内的蛋白质染色。其颜色变化与活细胞蛋白质成正比。
●2，方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80μL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20μL待测样品。继续培养2天,终止培养, 每孔加10% TCA(三氯乙酸)100μL, 4℃条件固定l h。用蒸馏水冲洗5遍,自然晾干后每孔加入4 mg/mL SRB溶液,室温下染色15min,弃上清,用1%乙酸冲洗5遍以去除非特异性结合的染料。每孔加入100 μL 10 mM Tris溶液,在492NM波长下测OD值,并计算抑制率。
SRB溶解在1%乙酸，终浓度为4 mg/mL
染料排斥法
●1，原理：细胞在损伤或死亡时，某些染料能穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色。而活细胞能阻止此类染料进入细胞内。以此鉴别活细胞和死细胞。
●2，方法：将稀释后的细胞悬液接种于96孔板上，每孔加80μL细胞悬液，在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养1天后每孔加入20μL待测样品，继续培养2天后消化，用0.4%(w/v)台盼蓝染液（终浓度为0.04%）染色3min，滴在计数板上，人工计数200个肿瘤细胞和计算抑制率。
抑制微管蛋白聚合的化合物筛选方法
●1，原理：微管骨架蛋白有一个很重要的特性，即在温度37℃，蛋白浓度大于10μM，
PH值为6.9左右，有Mg2+、GTP的情况下，微管蛋白能够在体外自组装成丝状微管，此过程可导致体系的吸光度变化，用此指标可检测微管聚合是否受到抑制。
●2，方法：96孔板中加入5μl的待测样品和5μl的10%DMSO为溶剂对照，50μl的测试用缓冲液，37℃孵育5min。350nm波长测定OD值，连续30分钟记录OD(每2分钟一次)，实验重复3次，取3次实验的平均值作为实验结果。
试剂:PIPES；氯化镁；EGTA；丙三醇；GTP；高纯度微管蛋白；DMSO。
测试用缓冲液:80mM PEPIS，2mM MgCl2，o.5mM EGTA，20%甘油，lμM GTP，l.5mg/ml99%微管蛋白，1%DMSO(pH为6.9)。4℃保存下载本文
