诸葛亮与周瑜的故事，出自《三国演义》中的多个章节。第五十一回中，周瑜与诸葛亮订立了夺取南郡的约定。周瑜受伤，却用计击败了曹兵，诸葛亮趁机夺取了南郡等地。第五十五回，诸葛亮让刘备顺利返回荆州，并让周瑜中了埋伏，士兵们还嘲讽周瑜。
第五十六回，诸葛亮识破了周瑜的计策，使得周瑜气急加上旧伤复发，最终不治身亡。曹操在邺郡庆祝铜雀台落成，召集群臣饮酒作诗。突然，东吴使者华歆前来，曹操决定让孙权和刘备相互吞并。周瑜上书孙权要求讨回荆州，鲁肃前往荆州，诸葛亮设计让刘备哭泣，鲁肃只好暂缓讨回。
周瑜得知后大怒，要鲁肃再次前往荆州，说东吴将取西川给刘备，但刘备需归还荆州。鲁肃再次前往，周瑜引五万水陆大军出发。周瑜到达荆州时，城上竖起刀，赵云守候，关羽、张飞、黄忠、魏延四路兵马杀来。周瑜旧伤复发，从马上摔下。周瑜被救回船后更加愤怒，决定去取西川。
周瑜到巴丘时，探子报告说上流有刘封、关平截住水路。诸葛亮派人送来信件，劝周瑜不要去取西川，以免曹军乘虚而攻。周瑜读完信后吐血，知道自己时日无多，上书孙权推荐鲁肃代替自己的职位。临死前，他感叹道：“既生瑜，何生亮！”
孙权得知周瑜病逝，放声大哭。按照周瑜的遗嘱，命鲁肃为都督。
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