1. 当单链DNA与互补的寡聚核苷酸片段结合时，在DNA聚合酶的作用下，可以沿着5’→3’的方向复制出互补的DNA。这段单链DNA被称为模板DNA，而寡聚核苷酸片段则称为引物。
2. 在PCR（聚合酶链式反应）中，双链DNA在高温下变性成为两条单链DNA，这两条单链都可以作为模板DNA。在相应的引物引导下，DNA聚合酶能够复制出新的DNA产物。
3. PCR利用上述基本过程，在待扩增的DNA序列的两端设计两条引物。一条引物位于DNA的5’端，另一条位于3’端。这两条引物分别与双链DNA的两条单链配对，形成一个扩增循环。
4. 在含有过量引物和DNA合成底物dNTPs的缓冲液中，通过高温变性和低温复性，引物能够与模板DNA配对，DNA聚合酶随后合成新的DNA链。
5. 由于引物和dNTPs过量，且反应体系中的产物DNA可以作为模板参与后续的扩增循环，PCR可以使模板DNA的量呈指数级扩增。
6. PCR反应能够在数小时内将几个DNA模板分子扩增到百万倍以上，从而能够从极微量的样品中获取目的基因，实现基因在体外的克隆。
7. 除了在分子生物学和基因工程中的应用，PCR还在医学研究和诊断中发挥了巨大的作用。
8. 常规PCR反应通常包括25至35个循环，变性温度为94℃，复性温度在37℃至55℃之间，延伸温度为72℃。使用的DNA聚合酶是Taq酶，它能够在高温下不失活。
9. 引物的设计对于PCR反应的成功至关重要。为了确保PCR能够准确、特异且高效地扩增模板DNA，引物的设计需要遵循一系列原则，包括引物长度、CG含量、Tm值、非特异性配对率、引物间的配对碱基数以及引物自身的配对情况。
10. 由于影响引物设计的因素众多，设计师常借助计算机辅助设计工具来进行引物的优化和设计。
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