4. 通过反转录酶的作用，以mRNA为模板在体外合成cDNA，然后将其与适当的载体连接并转化受体菌。这样，每个细菌都会含有一段特定的cDNA，并且可以繁殖扩增。这样构建的cDNA文库包含了细胞全部的mRNA信息。原核生物由于缺乏POLYA尾，通常不易进行反转录。
5. Mut+菌株能够快速利用甲醇作为碳源，而Muts菌株则不能。因此，Mut+菌株在含有甲醇的MM平板上能够快速生长，而Muts菌株仅能在含有葡萄糖的MD平板上快速生长。
6. 切口平移法（nick translation）利用大肠杆菌DNA聚合酶I的多种酶促活性，将标记的dNTP掺入新合成的DNA链中，从而产生均匀标记的高活性DNA探针。操作步骤如下：
（1）取1ug DNA溶解于少量无菌双蒸水中，加入5ul 10×切口平移缓冲液（成分：0.5mol/L Tris-HCl，pH 7.2；0.1mol/L MgSO4；1mmol/L DTT；500mg/mL牛血清白蛋白），再加入除标记物（如?-32P-dATP）外的其他三种dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）的20mmol/L溶液各1ul。
（2）加入100ul标记物溶液，用无菌双蒸水补至总体积46.5ul，混匀后加入0.5ul稀释的DNaseI溶液，再次混匀；接着加入1ul（约5单位）的大肠杆菌DNA聚合酶I，混匀。
（3）在14-16℃下反应1-2小时。
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