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亚细胞提取液比例
2024-12-09 15:40:31 责编:小OO
文档


您要问的是亚细胞提取步骤吗?
1、采集水稻新鲜样品,用去离子水清洗3次,分开根和茎秆两部分。
2、准确称取植株鲜样0.5000克,将样品剪成约2mm的小段,在预冷的研钵下加入液氮研磨,研磨成粉末后放入4摄氏度下保存,后续所有的操作步骤都在4℃进行。
3、采用分级离心法分离细胞不同组分,亚细胞各组分提取剂为:250毫摩尔每升,蔗糖50毫摩尔每升,trisHCl1.0毫摩尔每升二硫赤藓糖醇、5.0毫摩尔每升抗坏血酸、百分之1.0(质量分数)PolyclarATPVPP,pH为7。
4、样品和提取剂以1:5的比例充分混合,用240微摩尔每升尼龙膜过滤,尼龙膜上残骸作为细胞壁组分。
5、上清液在500离心20min后,沉淀为细胞器组分,上清液继续在65000离心3小时,所得上清液为可溶性组分。
6、将各组分移入三角瓶中,在电热板上蒸发至5毫升左右,加入10毫升和3毫升高氯酸,消煮至澄清透明后定容,过滤后放入4摄氏度冰箱保存,待测。

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