酶的特征性常数包括米氏常数（Km），它是研究酶促反应动力学最重要的常数。Km的数值等于酶促反应达到最大速度一半时的底物浓度。米氏常数可以表示酶与底物之间的亲和能力，Km值越大，亲和能力越强，反之亦然。此外，Km值可以用来确定一条代谢途径中的限速步骤，即反应最慢的那一步，该酶也被称为这条途径的关键酶。通过Km值，还可以判断酶的最适底物，即酶可以催化的反应中，Km值最小的那个反应的底物。米氏常数只与酶的种类有关，而与酶的浓度和底物浓度无关，这一点与最大反应速度（Vm）是不同的。需要注意的是，米氏常数会随着反应条件（如温度和pH值）的改变而改变。
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