iCLIP技术是一种用于表征RNA结合蛋白与RNA交互作用的高通量测序方法。
能够以亚单核苷酸分辨率定义RNA和蛋白质交互位点。iCLIP技术可以在细胞中用紫外线刺激将RNA和蛋白质交互结合的位点上进行交联,并且通过RNA免疫分离和蛋白质酶切等步骤来纯化RNA和结合的蛋白质。在纯化后的样品中使用RT-PCR扩增RNA序列,并使用高通量测序技术来进行测序,从而确定RNA序列和与之结合的蛋白质序列。
通过iCLIP技术,可以定量测定RNA序列上与蛋白质相互作用的位点、准确定位RNA剪接和RNA编辑位点,以及鉴定与RNA相关的新的蛋白质结合因子等内容。iCLIP技术可以用于分析RNA和蛋白质之间的各种交互作用,从而揭示RNA在基因表达、剪接、RNA编辑和其他RNA过程中的作用机制。
中国iCLIP技术瓶颈:
核酸接头是整个iCLIP实验中最核心的关键物质之一。它能够引导DNA(与RNA对应)富集从头开始,把特定序列变多并被探测到,最终“捞出海面”,这就好比放出个“信号智能追踪器”,精确匹配、忠诚锚定序列末端是对它的基本要求。
国内的方法是设计随机引物,广撒薄收,总会撞上某一段。但随机引物接不上RNA和蛋白质结合的位点,必须特别设计从头开始的接头合成对应的DNA链,把RNA“拓印”下来,进行测序。
“特别设计”在某些实验中体现为预腺苷化、磷酸化的处理,但在国内买不到此类“接头”。事实上,在拥有雄厚技术实力、大量知识产权的大公司的国家,基因测序公司提供包括接头合成在内的服务,中国国内却找不到。
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