到了交配季节，雌蛇常会发出一种特有的气味，这是由于它皮肤和尾基部腺体的分泌物所致。有的气味相当强烈，人亦能闻出来。雄蛇便是依靠敏锐的嗅觉而找到同类的雌蛇的。有的蛇有集群过冬的习性，这样在出蛰时，两性相遇的机会就较多，往往在越冬场所的附近就进行交配，然后才分散活动。
有些蛇在交配前有求偶的表现。那些头部腹面两侧具有疣粒的雄蛇，在求偶时就用疣粒去抚摩雌体，王蛇的雄蛇则用残留的后肢去搔抓雌蛇，引起雌蛇的性感，抓的声音甚至在几尺远的地方都可以听见。浙江短尾峻的雄蛇在发现雌蛇时，就在后面紧追，频频伸出舌头，去嗅雌蛇的尾基部，并且不停地抖动尾部，一有机会，便冲到雌蛇的背上，或紧挨其一侧。然后，雌雄两蛇后半身绕在一起，进行交配。这时雌蛇的尾部翘起，剧烈抖动，交配时间仅为2～6分钟。蛇岛的中介蝮在交配前，雄蛇频频点头，向雌蛇头部接近，雌蛇头部微微抬起，并点头，交配约18分钟，之后雄蛇尾部下垂，交接处脱开。
蛇交配时间的长短，差别颇大，一般只有几分钟，但亦有很长的。成都动物园饲养的黑眉锦蛇，在1965年4月初发生一次交配，从上午8时继续到下午7时，交配时间为11小时。我们在1975年5月17日，也观察到蛇笼里的一对黑眉锦蛇在交配，从午后3时半到第二天凌晨4时半才交配完毕，长达13小时之久。当时气温为21～24℃，相对湿度为78％～93％。交配时，雄蛇尾部摆动不停，发出声音来。交配时间还有更长的，例如红点锦蛇，可长达20小时以上。
雌蛇的交接器为泄殖肛腔，雄蛇的交接器是一对袋状的结构叫做半阴茎，位于尾基内部，袋的内壁上有许多小棘，棘的大小和数量因蛇的种类而有不同，半阴茎的形状亦有种的差异。交配时，袋的内面向外翻出体外，插入雌体的泄殖肛腔内，进行体内受精，但每次交配只使用一侧的半阴茎。在繁殖季节内，一条雄蛇可和几条雌蛇交配，但雌蛇只交配一次，因此，养蛇场里常常让一条雄蛇配上几条雌蛇进行繁殖。例如银环蛇大致10条雌蛇配上2～3条雄蛇就够了。交配后，精子可在雌蛇输卵管内长期生存，一对浙江短尾蝮交配一次，雌蛇连续产仔3年，第一年产仔7条，第二年产仔4条，第三年产仔14条。有的蛇，其精子可在雌体内生存5年之久。
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