作者
Youjuan Zhang
安捷伦科技（上海）有限公司，中国上海，邮编 200131摘要
使用配备分流/不分流进样口和火焰离子化检测器 (FID) 的 Agilent 8860 气相色谱仪分析 37 种脂肪酸甲酯 (FAME) 混标和蛋白水解配方奶的实际样品。本应用简报介绍了 37 种 FAME 混合物的分析，分析速度比 GB 5009.168-2016 更快，可实现出色分离。
使用 Agilent 8860 气相色谱仪快速分析37 种 FAME前言
脂肪酸是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。脂肪酸可以分为三类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。有些脂肪酸是必需脂肪酸（如亚油酸），这类脂肪酸无法由身体合成，只能从食物中获得。ω-3 和 ω-6 脂肪酸属于多不饱和脂肪酸，在人体营养中发挥着关键作用，其中包括花生四烯酸 (ARA)、二十碳五烯酸(EPA) 和二十二碳六烯酸 (DHA)。ω-3 脂肪酸可以预防心脏病和高血压等疾病。脂肪在营养和食品化学领域具有非常重要的作用。
水解和甲基化是最常用的脂肪酸测定方法；脂肪酸的酯化可降低极性，促进不饱和异构体的分离。脂肪酸甲酯 (FAME) 的分析是食品分析中最重要的应用之一。
GB 5009.168-2016 规定了食品中 37 种脂肪酸的测定。本方法详细描述了样品预处理和气相色谱 (GC) 参数，该方法建议使用强极性氰丙基聚硅氧烷型色谱柱(100 m × 0.25 mm, 0.2 µm)。该方法可在 82 分钟内分离 37 种 FAME。之前的安捷伦应用简报表明，使用配备Agilent J&W DB-FastFAME Intuvo 气相色谱柱的 Agilent Intuvo 9000 气相色谱系统以氦气作为载气，可在8 分钟内分离 37 种 FAME2。这种快速分析得益于Intuvo 的直接加热技术，该技术可使色谱柱以 250 °C/min 的升温速率加热。本应用简报介绍了采用两种长度的
DB-FastFAME 色谱柱、以氮气为载体的
8860 气相色谱系统方法，该方法相对较
快。测定了峰面积的 RSD，并对 ARA、
EPA、DHA 等关键的中性脂肪进行了定量
分析。为证明该方法的适用性，本应用还
对婴儿配方奶样品进行了分析。
实验部分
试剂与标准品
37 组分 FAME 混标（部件号 CDAA-
252795-MIX-1 mL）以及 C20:4n6（部件
号 CDAA-253207M-10 mg）、C20:5n3（部
件号 CDAA-253209M-10 mg）和 C22:6n3
（部件号 CDAA-253228M-10 mg）的单标准
品均购自上海安谱科学仪器有限公司。混
标中各组分的浓度为 200–400 mg/mL。
婴儿配方奶样品购自当地。根据
GB 5009.168-2016 进行样品预处理。
仪器
使用配备火焰离子化检测器 (FID) 的 8860
气相色谱仪分析 FAME。使用配备5 µL
进样针和分流/不分流进样口的 Agilent
7693A 自动液体进样器进样。表 1 和表 2
列出了仪器和条件。
表 1. Agilent DB-FastFAME 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm
的方法条件
2结果与讨论
图 1 为 30 m DB-FastFAME 色谱柱上获得的 37 组分 FAME 混标的典型色谱图。在某些应用中，顺式和反式 C18:1、顺式
和反式 C18:2、C22:0、C20:3、C22:6、
C24:1 可能发生共流出，导致峰归属出现问题。如图 1 所示，8860 气相色谱系统使用表中条件，37 种化合物都得到了完全分离，峰形尖锐对称且运行时间缩短至 24 分钟以内。特别值得注意的是分离顺-反异构体以及 EPA 和 DHA 组分的能力。该方法对于复杂混合物中脂肪酸的定量分析非常有用，特别是测定鱼油等基质中的 EPA 和 DHA。与 0.18 mm 内径色谱柱相比，这种 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm 色谱柱内径较大、膜厚较厚，具有更大的色谱柱容量和更长的色谱柱寿命。
蛋白水解配方奶是对牛奶过敏婴儿的良好选择，按水解程度可分为三种类型：部分水解配方奶、深度水解配方奶和氨基酸配方奶。图 2–4 显示三种不同类型蛋白水解配方奶的分析结果。包括 C18:2n6、C18:3n3、ARA、DHA 在内的关键 FAME
易于检测和定量。
2
4
:
1
2
2
:
6
n
3
(
D
H
A
)
时间 (min)
C18:1 和
C18:2 顺式/反式
异构体的 R s ≥ 2.27
C20:2、C21:0、
C20:3n6、C20:4n6
(ARA) 和 C20:3n3
的 R s ≥ 2.18
C22:0 和
C20:5n3 (EPA)
的 R s = 1.98
C24:0、C24:1 和
C22:6n3 (DHA)
的 R s ≥ 1.84
C
1
8
:
1
n
9
c
C
1
8
:
1
n
9
t
C
1
8
:
2
n
6
t
C
1
8
:
2
n
6
c
C
2
:
2
C
2
1
:
C
2
:
3
n
6
C
2
:
4
n
6
(
A
R
A
)
C
2
:
3
n
3
C
2
:
5
n
3
(
E
P
A
)
C
2
2
:
C
2
4
:
图 1. 37 组分 FAME 混标在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱（部件号 G3903-63011）上得到的 GC/FID 色谱图
图 2. 氨基酸配方奶中的 FAME 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上得到的 GC/FID 色谱图
3
4
图 3. 深度水解配方奶中的 FAME 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上得到的 GC/FID
色谱图
图 4. 部分水解配方奶中的 FAME 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上得到的 GC/FID 色谱图
≥ 0.9997。图 5、图 6、图 7 显示了校准曲线。
对混标进样六次测试方法重现性。由图 8 可知，除 C4:0 以外，所有化合物的峰面积
RSD% 均远低于 1%。这表明 8860 气相色谱系统是一种可靠的脂肪酸分析系统。
高效的 0.18 mm 内径色谱柱有提高分析
效率的潜力，缩短分析时间的同时不损失分析性能。如图 9 所示，使用这种短色谱柱可实现更快的分析（14 分钟以内），而分离度几乎相同。关键化合物的分离度值如图 1 和图 9 所示。图 5. 5–1000 µg/mL 的 C20:4n6 (ARA) 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上的校准曲线
浓度 (ng/µL) 0200400600800
峰面积
20
40
60
80
100
120
140
160
12
3
4
5
6
相关系数：0.9998
相对标准差% (3)：5.635
图 6. 5–1000 µg/mL 的 C20:5n3 (EPA) 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上的校准曲线0200400600800
峰面积
50
100
150
200
12
3
4
5
6相关系数：0.9998
相对标准差% (5)：4.996
浓度 (ng/µL)
图 7. 5–1000 µg/mL 的 C22:6n3 (DHA) 在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上的校准曲线
浓度 (ng/µL) 0200400600800
峰面积
20
40
60
80
12
3
4
5
6相关系数：0.9998
相对标准差% (6)：–4.5451e–1
5
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本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。© 安捷伦科技（中国）有限公司，2019 2019 年 2 月 19 日，中国出版 5994-0687ZHCN
结论
本应用简报证明配备自动进样器和 FID 的 8860 气相色谱仪可以为 37 种 FAME 的分析提供更快、更可靠的解决方案。采用两种专为 FAME 分析设计的毛细管柱；二者均获得了不降低分离度的出色效率。30 m DB-FastFAME 色谱柱提供了更大的色谱柱容量和更高的耐用性，而 20 m DB-FastFAME 色谱柱的运行时间更短。容量为 16 个样品瓶的 7693A 自动进样器与 8860 气相色谱仪 EPC 控制确保良好的重现性和操作简便性，适用于分析快速的
食品行业以及常规分析。
参考文献
1. Zhou, Y.; Wu, H. 改善对 37 种脂肪酸
甲酯的分析，安捷伦科技公司应用简
报，出版号 5991-8706ZHCN ，2018
2. Zhou, Y. 快速分离脂肪酸甲酯，安
捷伦科技公司应用简报，出版号
5994-0116ZHCN ，2018
图 8. 37 组分 FAME 混标在 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm DB-FastFAME 色谱柱上六次重复进样得到的峰面积
RSD%
C 4:C 6:C 8:C 10:C 11:C 12:C 13:C 14:C 14:C 15:C 15:C 16:C 16:C 17:C 17:C 18:C 18:1n 9C 18:1n 9C 18:2n 6C 18:2n 6C 18:3n C 18:3n C 20:C 20:C 20:C 21:C 20:3n C 20:4n C 20:3n C 22:C 20:5n C 22:C 22:C 23:C 24:C 24:C 22:6n 图 9. 37 组分 FAME 混标在 20 m × 0.18 mm, 0.2 µm DB-FastFAME 色谱柱（部件号 G3903-63010）上得到的 GC/FID
色谱图
C 24:1C 22:6n 3 (
D H A )
时间 (min)
C18:1 和
C18:2 顺式/反式异构体的 R s ≥ 2.12
C20:2、C21:0、C20:3n6、C20:4n6 (ARA) 和 C20:3n3 的 R s ≥ 1.91
C22:0 和 C20:5n3 (EPA) 的 R s = 1.82 C24:0、C24:1 和 C22:6n3 (DHA) 的 R s ≥ 1.38
C 18:1n 9c
C 18:1n 9t
C 18:2n 6t
C 18:2n 6c
C 20:2C 21:0
C 20:3n 6
C 20:4n 6 (A R A )
C 20:3n 3
C 20:5n 3 (E P A )
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