1．DPPH:

a)样品溶液浓度初测定，（0~4℃）储藏。

b)称4mg，加无水甲醇溶解于烧杯，转移至100mL容量瓶定容。

浓度为0.04mg/mL。避光（0~4℃）储藏。

i.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml无水甲醇）混合后充分振摇，

反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ

=517nm。平行测定2次。A1

ii.5ml离心管（2ml待测样+2mL无水甲醇）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ

=517nm。A2

iii.5ml离心管（2mlDPPH·溶液+2ml待测样）混合后充分振摇，反映稳定，40min后测定。以无水甲醇为对照分光检测λ

=517nm。A3

清除率（Y）=[1-（A3-A2）/A1]∙100%。

平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。

2．·OH

a)PBS制配：磷酸二氢钠31.2g 1000ml蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g

1000ml蒸馏水定容。移液管移液磷酸二氢钠190ml、磷酸氢二钠

810ml 于1000ml 烧杯，pH 计调7.4。

b) 邻二氮菲：148mg 蒸馏水定容100ml 。

c) 硫酸亚铁：208.5mg 蒸馏水定容100ml 。

d) 100ml30%双蒸馏水定容300ml 。封口。

i. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚

铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ

=536nm 。A1

ii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 硫酸亚

铁混匀后+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光λ=536nm.A2 iii. 10ml 离心管（0.5ml 邻二氮菲溶液+1mlPBS 混匀后+0.5ml 待测样

+0.5ml 硫酸亚铁混匀后+0.5ml 22O H +双蒸馏水定容10ml ）37℃水

浴1h 后分光λ=536nm.A3

iv. 10ml 离心管（1mlPBS+双蒸馏水定容10ml ）37℃水浴1h 后分光

λ=536nm.A 空。

清除率（Y ）=（A3-A1）/（A2-A1）∙100%

平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE 大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE 越大清除能力越强。

3．-

2O ·：

a) 磷酸二氢钠31.2g 1000ml 蒸馏水定容，磷酸氢二钠71.6g 1000ml 蒸馏水定容。用滴管取磷酸二氢钠加入到磷酸氢二钠中，边加边

b)邻苯三酚：94.58g蒸馏水溶解定容100ml。

i.（5mlPBS+0.1mL蒸馏水+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+

一滴HCl终止反应。λ=325nm。A0【对照】

ii.（5mlPBS+0.1ml样品液+0.2ml邻苯三酚）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。λ=325nm。A1

iii.（5mlPBS+0.2mL蒸馏水+0.1ml样品液）4min25℃水浴（+一滴HCl终止反应。λ=325nm。A2

清除率（Y）=1-（A1-A2）/A0∙100%

平行测定3次，取平均值。分别以试样质量浓度和清除率做显形回归方程并计算清除率为50%时，代测样品的浓度值，即半抑制浓度IC50。

自由基清除能力，AE=1/IC50。根据AE大小判断待测样品清除自由基能力的大小，AE越大清除能力越强。下载本文