仪器：
试管、定量滤纸、三角瓶、分光光度计、摇床、Ph计
试剂：
TTC（氯化三苯基四氮唑）、浓HCl、Tris（三强甲基氨基甲烷）、甲醇、TPF（三苯基甲臜za）
配制：
1.Ph 7.6 、0.5mol/L Tris 缓冲溶液：60.57g Tris溶于水，用1mol/L
HCl（按浓盐酸：水=1：1比例配制）准确调pH至7.6，定容至1000ml；
2.1% TTC溶液：1g TTC溶于上述缓冲液，定容至100ml；
3.1%葡萄糖溶液：1g葡萄糖溶于水，定容至100ml；
测定步骤：
1.4g过2mm（10目）筛新鲜土样于试管（25ml），加1%TTC溶液2ml，1%葡萄糖溶液2ml，摇匀；同时每个处理设置用Tris缓冲液2ml代替TTC对照；
2.试管于恒温箱（烘箱）暗室37℃培养24h，加甲醇20ml（少量多次），移入50ml三角瓶，摇床（180-220r/min）振荡 1h，过滤；
3.先用量筒测量滤液体积，然后将滤液于分光光度计485nm处测定吸光度值，用水和待测液润洗，直接测量下一个样品。
4.整个实验设置无土壤对照（加TTC溶液和葡萄糖溶液各2ml）。
标准曲线制备：
1.准确称取TPF 50mg于250ml 甲醇中，母液浓度为200mg/L。
2.吸取0，0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml母液于25ml容量瓶，用甲醇定容，TPF浓度分别为0，2，4，8，12，16，20mg/L。
脱氢酶活性计算：
脱氢酶活性（mgTPF/g干土/h）=（c*v）/（干土质量*24）
c：滤液中TPF的浓度（标准曲线查）；
v：滤液的体积；
干土质量：2g鲜土烘干后的质量；
24：暗室培养的时间。下载本文
