● 考点

　　碳水化合物的代谢试验

　　蛋白质和氨基酸的代谢试验

　　碳源和氮源利用试验

　　各种酶类试验

　　抑菌试验

　　复合生化试验

　　不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。在临床细菌检验工作中，除根据细菌的形态、染色、培养特性进行初步鉴定外，对绝大多数分离的未知菌的属、种鉴定，主要通过这些生物化学试验。

　　一、碳水化合物的代谢试验

　　原理：细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。

　　1.糖（醇、苷）类发酵试验

　　原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力各不相同，分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。

　　培养基：在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 

　　方法：接种，培养。结果：产酸：培养基中的指示剂呈酸性反应。

　　产气：可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。

　　不分解：培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。

　　应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。

　　2.氧化-发酵试验（O/F试验）

　　（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖而分解蛋白胨的细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。

　　（2）培养基HL：Hugh-Leifson培养基。

　　（3）方法：将待检菌同时穿刺接种于两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液状石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm。将培养基于35℃培养48小时或更长。

　　（4）结果：两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均产酸为发酵型；若仅不加液状石蜡的培养基产酸为氧化型。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与不发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。

　　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）

　　（1）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D半乳糖苷（ONPG），而生成黄色的邻-硝基酚。

　　（2）试剂：0.75M ONPG溶液

　　（3）方法：从培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟，加入0.25mlONPG试剂，水浴20分钟～3小时观察结果。

　　（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30分钟内显色。

　　（5）应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

　　4.七叶苷水解试验

　　（1）原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物，使培养基呈黑色。

　　（2）培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。

　　（3）方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。

　　（4）结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。

　　（5）应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。

　　5.甲基红试验

　　（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降至4.5以下，当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳性。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醚、气体和水等），则培养基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，是为阴性。

　　（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

　　（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养2～4天，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。

　　（4）结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。

　　（5）应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。

　　6.V-P试验

　　（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化为二乙酰，进而与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物，则为V-P试验阳性。

　　（2）培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

　　（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48小时后加入甲液（6%α-萘酚乙醇溶液）和乙液（40%KOH溶液），振摇。

　　（4）结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4小时后仍如故者即为阴性。

　　（5）应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

　　（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验

　　其原理为：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。具体试验方法有：①明胶液化试验；②吲哚试验（靛基质试验）；③硫化氢试验；④尿素酶试验；⑤苯丙氨酸脱氨酶试验；⑥氨基酸脱羧酶试验。

　　1.明胶液化试验

　　（1）原理：某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。

　　（2）方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7天，每日观察结果。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30分钟，再看结果。

　　（3）结果：培养基呈液化状态为阳性。

　　（4）应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外多数假单胞菌也能液化明胶。

　　2.吲哚（靛基质）试验

　　（1）原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂（对位二甲氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚。

　　（2）培养基：蛋白胨水培养基。

　　（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48小时，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。

　　（4）结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　　3.硫化氢试验

　　（1）原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。

　　（2）培养基：醋酸铅培养基。

　　（3）方法：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48小时观察结果。

　　（4）结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。

　　4.尿素分解试验

　　（1）原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。

　　（2）培养基：尿素培养基。

　　（3）方法：将待检菌接种于尿素培养基，于35℃培养18～24小时观察结果。

　　（4）结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

　　5.苯丙氨酸脱氨酶试验

　　（1）原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。

　　（2）培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。

　　（3）方法：将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于35℃培养18～24小时，滴加10%三氯化铁试剂3～4滴，自斜面上方流下。

　　（4）结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果，延长反应时间会引起褪色。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠杆菌科中其他细菌均为阴性。

　　6.氨基酸脱羧酶试验

　　（1）原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和二氧化碳，使培养基变碱。使指示剂显示出来。

　　（2）培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。

　　（3）方法：将被检菌分别接种于赖氨酸（或鸟氨酸或精氨酸）培养基和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液状石蜡或矿物油，于35℃培养1～4天，每日观察结果。

　　（4）结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为溴甲酚紫）为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能作出判断。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

　　（三）碳源和氮源利用试验 是细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。在枸橼酸盐培养基中，细菌只有利用枸橼酸盐作为碳源，分解后生成碳酸钠使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。常用的试验方法有枸橼酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验。

　　1.枸橼酸盐利用试验

　　（1）原理：某些细菌能以铵盐为唯一氮源，并且利用枸橼酸盐作为唯一碳源，可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐，使培养基变为碱性。

　　（2）培养基：枸橼酸盐培养基。

　　（3）方法：将被检菌接种于枸橼酸盐培养基，于35℃培养1～4天，每日观察结果。

　　（4）结果：培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由淡绿色变为深蓝色为阳性；不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基则不变色，为阴性。

　　（5）应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。

　　2.丙二酸盐利用试验

　　（1）原理：有的细菌可利用丙二酸盐作为唯一碳源，将丙二酸盐分解生成碳酸钠，使培养基变为碱性。

　　（2）培养基：丙二酸盐培养基。

　　（3）方法：将被检菌接种于上述培养基，35℃培养24～48小时后观察结果。

　　（4）结果：培养基由淡绿色变为深蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。

　　（5）应用：肠杆菌科中属间及种的鉴别。克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性，其他菌属均为阴性。

　　（四）各种酶类试验

　　1.氧化酶试验

　　（1）原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。

　　（2）试剂：1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。

　　（3）方法：常用方法有以下三种：

　　1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。

　　2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，蘸取菌少许，然后加试剂。

　　3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

　　（4）结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

　　（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

　　2.过氧化氢酶试验（触酶试验）

　　（1）原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。

　　（2）试剂：3%过氧化氢溶液。

　　（3）方法：取菌置于洁净的试管内或玻片上，然后加3%过氧化氢数滴；或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。

　　（4）结果：有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。

　　（5）应用：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

　　3.盐还原试验

　　（1）原理：盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，盐还原为亚盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，盐或亚盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使盐还原的细菌从盐中获得氧而形成亚盐和其他还原性产物。

　　但盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使盐还原为亚盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚盐和离子态的铵；有的细菌能使盐或亚盐还原为氮，如假单胞菌等。

　　盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚。

　　（2）培养基：盐培养基。

　　（3）试剂：甲液（对氨基苯磺酸0.8g＋5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g＋5mol/L醋酸100ml）。

　　（4）方法：被检菌接种于盐培养基中，于35℃培养1～4天，将甲、乙液等量混合后（约0.1ml）加入培养基内，立即观察结果。

　　（5）结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①盐没有被还原，试验阴性；②盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小导管，如有气泡产生，表示有氮气生成。

　　（6）应用：肠杆菌科细菌均能还原盐为亚盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌均可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

　　4.脂酶试验

　　（1）原理：有的细菌产生脂酶，可分解脂肪成游离的脂肪酸，从而使培养基中与脂肪结合形成无色化合物的维多利亚蓝释放出来，呈现深蓝色。

　　（2）培养基：脂酶培养基（含维多利亚蓝）。

　　（3）方法：将被检菌接种于上述培养基中，于37℃培养24小时。

　　（4）结果：培养基变为蓝色为阳性，阴性为粉红色或无色。

　　（5）应用：主要用于厌氧菌的鉴别。类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酶，其他类杆菌则为阴性；芽胞梭菌属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也有此酶，而其他梭菌为阴性。

　　5.卵磷脂酶试验

　　（1）原理：有的细菌产生卵磷脂酶（α-毒素），在钙离子存在时，此酶可迅速分解卵磷脂，生成甘油酯和水溶性磷酸胆碱。

　　（2）培养基：1%卵黄琼脂平板。

　　（3）方法：将被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于35℃培养3～6小时。

　　（4）结果：若3小时后在菌落周围形成乳白色混浊环，即为阳性，6小时后混浊环可扩展至5～6mm。

　　（5）应用：主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酶，其他梭菌为阴性。

　　6.DNA酶试验

　　（1）原理：某些细菌产生DNA酶，可使长链DNA水解成寡核苷酸链。因为长链DNA可被酸沉淀，寡核苷酸链则溶于酸，所以当在菌落平板上加入酸后，会在菌落周围出现透明环。

　　（2）培养基：0.2%DNA琼脂平板。

　　（3）方法：将被检菌点种于上述平板上，于35℃培养18～24小时，然后用1mol/L盐酸覆盖平板，观察结果。

　　（4）结果：在菌落周围出现透明环为阳性，无透明环为阴性。

　　（5）应用：在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶，故本试验可用于细菌的鉴别。

　　7.凝固酶试验

　　（1）原理：致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变为凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。

　　（2）方法：

　　1）玻片法：取兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。

　　2）试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，于37℃水浴3～4小时。

　　（3）结果：玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固现象判为阳性。

　　（4）应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。

　　8.CAMP试验

　　（1）原理：B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的B-溶血素溶解红细胞的活性，因此在两菌（B-群链球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现矢形（半月形）的溶血区。

　　（2）培养基：血琼脂平板。

　　（3）方法：先以产B-溶血素的金黄色葡萄球菌划一横线接种于血琼脂平板上，再将被检菌与前一划线作垂直划线接种，两线不能相交，相距0.5～1cm，于37℃培养18～24小时，观察结果。每次试验都应设阴性和阳性对照。

　　（4）结果：在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。

　　（5）应用：在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。

　　9.胆汁溶菌试验

　　（1）原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。

　　（2）试剂：10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁。

　　（3）方法：

　　1）平板法：取10%去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30分钟后观察结果。

　　2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35℃水浴10～30分钟，观察结果。

　　（4）结果：平板法以“菌落消失”判为阳性；试管法以“加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混浊”判为阳性。

　　（5）应用：主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。

　　（五）抑菌试验

　　1.0/129抑菌试验

　　（1）原理：O/129（二氨基喋啶）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属细菌无抑制作用。

　　（2）培养基：碱性琼脂平板。

　　（3）方法：将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取O/129纸片（含药40μg）贴于平板上，35℃培养18～24小时观察结果。

　　（4）结果：出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药。

　　（5）应用：用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属对0/129敏感，而气单胞菌属耐药。

　　2.杆菌肽试验

　　（1）原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。

　　（2）培养基：血琼脂平板。

　　（3）方法：将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于血液琼脂平板上，稍干后贴上0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃培养18～24小时观察结果。

　　（4）结果：抑菌环直径＞10mm为敏感，抑菌环直径＜10mm为耐药。

　　（5）应用：用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。

　　3.奥普托欣（Optochin）试验

　　（1）原理：几乎所有肺炎链球菌对Optochin敏感，而Optochin对其他链球菌则无抑制作用。

　　（2）培养基：血琼脂平板。

　　（3）方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的Optochin纸片，35℃培养18～24小时观察结果。

　　（4）结果：抑菌环直径＞14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。

　　（5）应用：主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。

　　重点小结：

　　金黄色葡萄球菌：凝固酶试验、耐热DNA酶试验、甘露醇分解试验均阳性，凝固酶试验（最简单）。

　　白喉棒状杆菌毒力试验，Elek平板试验，只有携带β-棒状噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素。

　　碳水化合物的代谢试验

　　1.糖（醇、苷）类发酵试验：肠杆菌科细菌。

　　2.氧化-发酵试验（O/F试验）：肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。

　　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）：迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。

　　4.七叶苷水解试验：D群链球菌阳性，其他链球菌阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。 

　　5.甲基红试验：大肠埃希菌阳性；产气肠杆菌阴性。

　　6.V-P试验：与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

　　蛋白质和氧基酸的代谢试验

　　1.明胶液化试验：肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。

　　2.吲哚（靛基质）试验：肠杆菌科细菌的鉴定。

　　3.硫化氢试验：沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。

　　4.尿素分解试验：肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性，另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

　　5.苯丙氨酸脱氨酶试验：用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠杆菌科中其他细菌均为阴性。

　　6.氨基酸脱羧酶试验：用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

　　碳源和氮源利用试验

　　1.枸橼酸盐利用试验：在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。

　　2.丙二酸盐利用试验：克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性，其他菌属均为阴性。 

　　各种酶类试验

　　1.氧化酶试验：用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

　　2.过氧化氢酶试验（触酶试验）：革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

　　3.盐还原试验：肠杆菌科细菌均能还原盐为亚盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

　　4.脂酶试验：用于厌氧菌的鉴别。类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酶，其他类杆菌则为阴性；芽胞梭菌属中产芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌也有此酶，而其他梭菌为阴性。

　　5.卵磷脂酶试验：主要用于厌氧菌的鉴定。产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酶，其他梭菌为阴性。

　　6.DNA酶试验：在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶，故本试验可用于细菌的鉴别。

　　7.凝固酶试验：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标。

　　8.CAMP试验：在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。

　　9.胆汁溶菌试验：用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。

　　抑菌试验

　　1.0/129抑菌试验：用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属对0/129敏感，而气单胞菌属耐药。

　　2.杆菌肽试验：用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。

　　3.奥普托欣（Optochin）试验：用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。