一、实验目的：

1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；

2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。

二、实验原理：

细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。

简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。

三、实验材料：

1.菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccus aureus等培养好的细菌斜面；

2.染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油

3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。

四、实验步骤：

1.涂片：在洁净无脂的载玻片滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。

2.干燥：室温自然干燥

3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。

4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min左右。

5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。

6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。

7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野，再用油镜观察。

五、注意事项

1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏

3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。

4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。

5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。  

6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。                                         

7. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。

六、实验报告

1. 结果

绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数、及观察到的颜色。

2. 思考题（任选两题）

（1）使用油镜时，为什么必须用香柏油？应特别注意哪些问题？

（2）油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？对同一微生物制片，用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点？

（3）镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？

（4）涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？下载本文