(1) 实验目的
掌握液相色谱法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量的原理、色谱分析的参考条件及各项操作。
(2) 原理
样品经过前处理后，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
(3) 试剂
色谱纯甲醇、超纯水
(4) 仪器设备
Agilent1200系列液相色谱
(5) 样品处理：
市售可乐饮料经超声脱气15 min, 先用普通漏斗过滤, 再经0. 45 μm 滤膜过滤
准确称取预先烘干的茶叶1. 000 g 于100 mL 锥形瓶中，加约90 mL 水，在100 ℃水浴锅中浸提1 h 后冷却至室温，过滤，滤液转移到100 mL 容易瓶中，洗涤残渣3 次一并转入容易瓶，定容至刻度线，再经0. 45 μm 滤膜过滤上样分析
(6)色谱条件：
本实验采用1200系列 高效液相色谱仪带紫外检测器; 色谱柱:AgilentC18( 4.6 mm × 250mm，5 μm) ; 流动相: 甲醇:水( 55：45，V /V ) ; 流速: 1.0 ( mL·min － 1 ) ; 检测波长: 272 nm; 柱温: 35℃; 进样量: 10 μL。
(7) 实验结果计算
样品中咖啡因的含量按下式计算：
式中：X——样品中咖啡因的含量，g/kg；
A——进样体积中咖啡因的质量，mg；
V2——进样体积，mL；
V1——样品稀释液总体积，mL；
m——样品质量，g。下载本文
