一、选择题

1．DNA粗提取实验中，应尽可能避免DNA断裂和降解。相关操作正确的是（    ）

A．以菜花为材料进行研磨时，可以适当加热以促进DNA溶解

B．向DNA溶液中迅速加入蒸馏水，使DNA快速析出

C．将丝状物溶解到2 mol·L-1NaCl溶液中后，加水析出

D．向DNA溶液中加入冷却的酒精并沿同一方向缓慢搅拌

2．下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是（  ）

A．洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度

B．将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝

C．常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取

D．用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少

3．关于DNA的粗提取与鉴定实验的表述哪项是错误的（  ）

A．离心沉淀的血细胞中加水是为了提取DNA

B．氯化钠溶液的物质的量浓度为2mol/L时，DNA溶解

C．向溶解DNA的烧杯中加蒸馏水是漂洗DNA

D．离心后除去血液中的上清液是为了除去杂质

4．下列有关实验操作的叙述，不正确的是（  ）

A．鉴定蛋白质实验中，要先将双缩脲试剂A、B等量混匀后再加入待测样液

B．绿叶色素分离实验中，要先加适量层析液再放划好滤液细线的滤纸条

C．进行DNA粗提取实验时，可使用新鲜的鸡血细胞作为理想材料

D．在果酒制作的过程中，应将装置密封放在25℃左右的环境下

5．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（  ）

A．酵母菌和菜花均可作为提取DNA的材料

B．2 mol/L和0．014 mol/L的NaCl溶液均可溶解DNA

C．研磨植物细胞时加入洗涤剂是为了溶解DNA

D．在沸水浴条件下DNA与二苯胺反应呈现蓝色

6．DNA粗提取实验中，应尽可能避免DNA断裂和降解。相关操作正确的是

A．以菜花为材料进行研磨时，可以适当加热以促进DNA溶解

B．向DNA溶液中迅速加入蒸馏水，使DNA快速析出

C．将丝状物溶解到2 mol·L-1NaCl溶液中后，加水析出

D．向DNA溶液中加入冷却的酒精并沿同一方向缓慢搅拌

7．有关PCR技术的说法，不正确的是（  ）

A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B．PCR技术的原理是DNA双链复制

C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

8．（2011•广东）以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是（  ）

A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

9．（2014春•台江区校级期末）PCR是多聚酶链式反应技术的缩写，下列有关PCR过程叙述中不正确的是（  ）

A．目的基因DNA变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键

B．引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸

D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

10．（2013秋•和平区期末）有关PCR技术的说法，不正确的是（  ）

A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B．PCR技术的原理是DNA双链复制

C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

11．下面说法不正确的是（  ）

A．在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变

B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成

C．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程

D．透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内

12．SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是（  ）

A．增大蛋白质的相对分子质量

B．改变蛋白质分子的形状

C．掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别

D．减小蛋白质分子的相对分子质量

13．在DNA的粗提取实验中，加入与滤液体积相等的、冷却的A溶液，静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物。上面的A溶液是指     （  ）

A．0.9%的NaCl溶液

B．0.14 mol/L的NaCl溶液

C．质量分数为15%的HCl

D．体积分数为95%的酒精溶液

14．关于DNA粗提取和鉴定实验的操作及原理的叙述，正确的是

A．用蒸馏水使猪的红细胞涨破获取含DNA的滤液

B．控制NaCl溶液的浓度可以实现去除杂质的目的

C．用玻璃棒轻缓搅拌滤液可使析出的DNA量减少

D．利用DNA溶于乙醇的性质进一步纯化DNA

15．关于DNA的实验，叙述正确的是

A．用兔的成熟红细胞可提取DNA

B．PCR的每个循环一般依次经过变性-延伸-复性三步

C．DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝色产物

D．用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色，细胞核呈绿色，细胞质呈红色

16．下列属于PCR技术的条件的是（    ）

①单链的脱氧核苷酸序列引物    ②目的基因所在的DNA片段    ③脱氧核苷酸    ④核糖核苷酸     ⑤DNA连接酶        ⑥DNA聚合酶        ⑦DNA性内切酶

A．①②③⑤        B．①②③⑥

C．①②③⑤⑦      D．①②④⑤⑦

17．下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（  ）

A．DNA既溶于2mol/L的NaCl溶液也溶于蒸馏水

B．向鸡血细胞液中加蒸馏水是为了释放出DNA

C．向溶解DNA的浓盐溶液中加蒸馏水是为了析出DNA

D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同

18．下列化学试剂在实验中的作用不同的是（  ）

A．酒精在“微生物培养”和“检测生物组织中的脂肪”中的作用

B．盐酸在“观察植物细胞有丝”和“探究pH对酶的活性”中的作用

C．CuSO4在“检测生物组织中的还原糖”和“检测生物组织中的蛋白质”中的作用

D．蒸馏水在“提取纯净的动物细胞膜”和“利用鸡血粗提取DNA”中的作用

19．将释放出的血红蛋白以2 000 r/min的速度离心10 min后，可以看到试管中的溶液分为4层，其中哪一层是血红蛋白的水溶液（  ）

A．第一层无色透明      B．第二层白色

C．第三层红色透明     D．第四层暗红色

20．下列有关提取和分离血红蛋白的叙述，错误的是（  ）

A．样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液

B．通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取

C．可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化

D．可通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度

二、综合题

21．玉米为一年生植物．某农场种植的H品种玉米自交后代中，发现了叶片颜色为黄绿色的变异植株．此变异植株因光合作用不足，在开花前死亡．让H品种玉米进行单株自交，其中某株玉米所结种子再种植，子一代中叶片黄绿色有125株，叶片绿色有335株．有研究者对上述变异提出两种假设：

假设1：与叶绿素合成相关的酶的基因（M基因）发生了基因突变；

假设2：叶片黄绿色是由于“含M基因”的染色体片段丢失所致．

请分析回答：

（1）上述性状分离结果可用假设     解释．假设2所述的变异属于   变异．

（2）若假设1成立，则叶片黄绿色变异为    （显性，隐性）突变．检测该变异是否由单基因突变引起

（能，不能）用测交实验，理由是     ．

（3）提取      的DNA，利用PCR技术进行特异性扩增，若     ，则证明假设2不成立．

22． PCR技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行研究的问题，而被广泛应用，此过程需要一种Taq DNA聚合酶。请回答有关问题：

（1）体内DNA复制过程中用解旋酶打开双链DNA，而PCR技术中应用__________。

（2）Taq DNA聚合酶是从水生耐热细菌Taq中分离的。

①Taq DNA聚合酶的功能是________________________________________。

②Taq DNA聚合酶的化学本质为蛋白质，可用________法和__________法进行分离。

（3）相对于细菌分离，DNA分子的分离和提取操作要复杂的多。

①在DNA提取中两次用到蒸馏水，其目的分别是____________、_____________。

②实验中能否以哺乳动物成熟的红细胞为实验材料？为什么？__________________。

（4）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在________________中才能进行，并且要严格控制________条件。

（5）PCR中加入的引物有____________种，加入引物的作用是______________________。

23．花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

据图回答下列问题：

（1）过程①所需的酶是                         。

（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的            存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是        。原生质体经过              再生，进而和脱分化形成愈伤组织。

（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和                  植株的根尖，通过             、              、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中一定是杂种植株的有                     。

（6）对杂种植株进行                  接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

24．回答下列有关生物技术实践中的问题。

I．（1）果酒的制作离不开酵母菌。酵母菌是            微生物，在缺氧、           的发 酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

（2）醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。当缺少糖源时， 醋酸菌将

变为        ，再变为醋酸，该过程需控制的温度条件是________。

II．（1）植物组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化状态的过程称为________________。

（2）在再分化阶段所用的培养基中，含有植物激素 X 和植物激素 Y，逐渐改变培养基中这两种 植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况如下图所示，据图指出两种激素的不同浓度比与 形成芽、根、愈伤组织的关系：

①当植物激素 X 与植物激素 Y 的浓度比等于 1 时，未分化细胞群经形成愈伤组织；

②________________________________________________________________________；

③________________________________________________________________________；

④切取经光照一段时间后的幼苗芽尖处的组织块，消毒后，接种到诱导再分化的培养基中 培养，该培养基中两种植物激素浓度相同。从理论上分析，分化的结果是____________；原因 是________________。

III．选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。

（1）实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收 集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是__________________________________。

（2）在对样品进行处理时，主要包括_______、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析 等步骤。其中透析技术的原理是____________________________________________。

（3） 利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离，基本原理是_________________ （填“相对 分子质量大”或“相对分子质量小”）的蛋白质，路程较短，移动速度较快。

25．请分析回答下列问题：

（1）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染．常用的灭菌方法有      灭菌、干热灭菌和      灭菌．稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是      ．

①土壤取样．②称取lOg土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液

③吸取0.1mL溶液进行平板涂布．④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A．①②③④     B．①③②④

C．①②④⑨     D．①④②③

（2）利用物理或化学方法将酶固定在一定的空间内，这项技术称为      ．

（3）利用凝胶色谱法，      蛋白质先洗脱出来

（4）通过电泳法分离提纯蛋白质时，影响蛋白质迁移速率的因素是蛋白质分子的      、分子大小和分子形状．

（5）通过分析发现、DNA的复制方向总是从子链的      端向      端延伸．

26．某实验小组以洋葱组织为实验材料，进行DNA粗提取和鉴定的实验，实验主要过程如下图，回答下列问题：

（1）步骤一中需加入一定量的洗涤剂和    对洋葱组织进行处理，加入前者是为了瓦解细胞膜结构，加入后者的目的是____。将搅拌和研磨后的物质进行过滤，即可得到含有DNA的滤液。

（2）步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤，可以采用以下几种不同的方法：

①滤液中NaCl浓度在0.14 mol／L时可分离出DNA，若要再次提纯，需要将其溶解在  mol／L的NaCl溶液中；

②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，其目的是____；

③将得到的DNA粗提取物放在60～75℃水浴中保温10～15 min，蛋白质被破坏，但仍能得到纯度较高的DNA，说明了DNA                    .

（3）步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是___      _，依据的原理是             。得到纯净的DNA后，可利用DNA与             在沸水浴条件下发生显色反应，来对其进行鉴定。

27．中国女科学家屠呦呦获2015年诺贝尔生理医学奖，她研制的抗疟药青蒿素挽救了数百万人的生命。但是青蒿中青蒿素的含量很低，且受地域性种植影响较大。通过传统育种和现代生物技术可培育高青蒿素含量的植株。

（1）青蒿组织培养利用的生物学原理是                  。应选用生理状况好的青蒿嫩棱茎段作为外植体，这是因为其更容易被诱导                     。

（2）培养基中生长素和           两种激素的用量比例会影响细胞的分化方向，过程②的比值相对过程③的比值            （大、小或相等）

（3）为了研究青蒿素的产生原理，科学家通过一定方法提取青蒿的DNA，可用       试剂鉴定提取物中的DNA，沸水浴呈     色。利用PCR技术扩增该DNA，需用耐高温的_______催化，一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、复性和           三步。

28．运用学过的知识，回答有关现代技术实践的问题：

（1）在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成此现象的生物是           ．腐乳外部有一层致密的“皮”，这是           的匍匐菌丝形成的．制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是           繁殖形成的．

（2）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是           ；一般对配制的培养基采用           法灭菌．

（3）提取洋葱DNA时,要在切碎的洋葱中加入一定的             ,并进行充分地搅拌和研磨,待过滤后再收集研磨液．

（4）下图为花粉植株的培育途径

为了挑选到单核期的花药，通常选择           的月季花蕾．选择花药时一般通过镜检确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色．图中通过花药培养产生花粉植株，有两种途径，这两种途径之间没有并没有绝对的界限，主要取决于培养基中            。

29．（2015秋•朔州校级期末）图为人β﹣珠蛋白基因与其mRNA杂交的示意图，①～⑦表示基因的不同功能区．据图回答：

（1）上述分子杂交的原理是      ；细胞中β﹣珠蛋白基因中不能翻译的序列是      （填写图中序号）．

（2）细胞中β﹣珠蛋白基因开始转录、识别和结合①中序列的酶是      ．

（3）决定β﹣珠蛋白基因的编码区有7000个碱基对，其中有1000个碱基对的序列不编码蛋白质，剩下的序列转录产生的MRNA含      个密码子，最多能编码      个氨基酸（考虑终止）．

（4）家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力．将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药．为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的      和      之间．

（5）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞．该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、对干扰素基因特异的DNA引物对；TaqDNA聚合酶、      和      ．

（6）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制．通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以      ，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．

30．随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”：

请回答下列有关问题：

（1）样品处理中红细胞的洗涤要用__________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH 7．0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是______________。

（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是___________________，若要尽快达到理想的透析效果，可以__________________________（写出一种方法）。

（3）血红蛋白的纯化是通过____________法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，

（4）电泳利用了待分离样品中各种分子的_________________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

（5）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如上图所示。由图可知携带者有______种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是_____________________________________________________

参

1．D

【解析】DNA耐高温，因此适当加热不会促进DNA溶解，A错误；在0.14mol/LNaCl溶液中，DNA的溶解度最低，因此用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去滤液，B错误；DNA丝状物溶解在2 mol/LNaCl溶液中，加95%的冷酒精析出，C错误；DNA不溶于酒精，因此可用体积分数为95%冷酒精并沿同一方向缓慢搅拌析出DNA，D正确。

【考点定位】DNA的粗提取和鉴定

【名师点睛】DNA的粗提取和鉴定的原理是：

（1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同。

（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶液酒精。

（3）DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同。

（4）DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

2．C

【解析】

试题分析：DNA溶解度与洗涤剂无关，DNA与二苯胺水浴加热变蓝，不需要冷却；用玻璃棒搅拌，使DNA吸附在玻璃棒上，且DNA量不会减少．

解：A、洗涤剂能瓦解细胞膜，但不能增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度，故A错；

B、应将DNA丝状物放入一定浓度氯化钠溶解，再滴加二苯胺试剂，故B错；

C、常温下菜花匀浆中有些酶类可破坏DNA而影响DNA的提取，故C正确；

D、用玻璃棒搅拌的目的是让DNA充分溶解，慢搅拌滤液不会导致DNA获得量减少，故D错．

故选：C．

考点：DNA的粗提取和鉴定．

3．C

【解析】

试题分析：①DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠浓度的变化而变化的．当氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol/L时．DNA的溶解度最低．利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出．

②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精．利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA．

③DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂．

解：A、离心沉淀的血细胞中加水是为了使血细胞破裂释放DNA，从而提取DNA，A正确；

B、氯化钠溶液的物质的量浓度为2mol/L时，DNA溶解，B正确；

C、向溶解DNA的烧杯中加蒸馏水是为了降低氯化钠溶液的浓度，从而是DNA析出，C错误；

D、离心后除去血液中的上清液是为了除去杂质，D正确．

故选：C．

考点：DNA的粗提取和鉴定．

4．A

【解析】

试题分析：生物组织中化合物的鉴定：

（1）斐林试剂可用于鉴定还原糖，在水浴加热的条件下，溶液的颜色变化为砖红色（沉淀）．斐林试剂只能检验生物组织中还原糖（如葡萄糖、麦芽糖、果糖）存在与否，而不能鉴定非还原性糖（如淀粉）．

（2）蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应．

鉴定类实验的操作流程模板：取材（应该选取无色且富含被鉴定物质的材料）→处理材料（制备组织样液或制片）→加鉴定剂（根据实验原理和要求，准确添加所需的鉴定试剂）→观察，得出结论（对应实验目的进行准确描述，并做出肯定结论）．

解：A、鉴定蛋白质实验中，要先加双缩脲试剂A液，形成碱性环境后再加B液，A错误；

B、绿叶色素分离实验中，要先加适量层析液，然后往层析液中放入划好滤液细线的滤纸条，B正确；

C、进行DNA粗提取实验时，可使用新鲜的鸡血细胞作为理想材料，C正确；

D、在腐乳制作的毛霉生长阶段，应将豆腐块整齐排放并留有一定空隙，给毛霉生长的空间，D正确．

故选：A．

考点：检测蛋白质的实验；叶绿体色素的提取和分离实验；酒酵母制酒及乙酸菌由酒制醋；DNA的粗提取和鉴定．

5．C

【解析】此酵母和菜花的细胞都含有DNA，都可以作为提取DNA的材料，A正确；2 mol/L和0．014 mol/L的NaCl溶液均可溶解DNA ，2 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度较高，而0．014 mol/L的NaCl溶液中溶解度较低，B正确；研磨植物细胞时加入洗涤剂是为了瓦解细胞膜，C错误；在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，D正确。

【考点定位】“DNA的粗提取与鉴定”实验

【名师点睛】DNA粗提取和鉴定的原理：

1、DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。

2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

6．D

【解析】在实验中，应该尽可能避免DNA断裂和降解，从而获取更多的DNA，要做到缓慢搅拌并加入冷酒精析出DNA，加蒸馏水也要缓慢，防止DNA断裂，同时不能加入，否则DNA水解酶活性会上升，会加速分解DNA。评讲时应注意实验细节的分析。

【考点定位】DNA粗提取

7．D

【解析】

试题分析：解答本题需识记有关PCR技术的相关知识：

1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．

2、原理：DNA复制．

3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物．

4、过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开．

解：A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；

B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确；

C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；

D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误．

故选：D．

考点：PCR技术的基本操作和应用．

8．D

【解析】

试题分析：A、洗涤红细胞时，洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的是生理盐水，可防止红细胞破裂，A 正确；

B、哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器，提纯时杂蛋白较少，B 正确；

C、血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液（如果操作都正确，C 正确；

D、在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白的分子量比杂蛋白大，质量越大的，通过凝胶色谱柱的速度越快，D错误．

故选：D．

考点：蛋白质的提取和分离．

9．C

【解析】

试题分析：A、目的基因DNA变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，使双链DNA得以打开，A正确；

B、引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的，B正确；

C、PCR技术是在较高温度条件下进行的，该过程需要热稳定DNA聚合酶，且PCR反应的产物是DNA，因此原料是四种游离的脱氧核苷酸，不是核糖核苷酸，C错误；

D、PCR技术是在较高温度条件下进行的，因此PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高PCR，D正确．

故选：C．

考点：PCR技术的基本操作和应用．

10．D

【解析】

试题分析：A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；

B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确；

C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；

D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误．

故选：D．

考点：PCR技术的基本操作和应用．

11．D

【解析】

试题分析：缓冲物质指能调节溶液的pH值，使溶液的pH值在加入一定量的酸性物质或碱性物质时保持恒定或小范围变化的一种物质，A正确；缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，B正确；电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，C正确；透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内，D错误。

考点：本题考查微生物培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。

12．C

【解析】

试题分析：SDS（十二烷基硫酸钠）—聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入SDS的目的是使蛋白质完全变性，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别。所以C正确。A、B、D不正确。

考点：本题考查SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。

13．D

【解析】

试题分析：在DNA的粗提取实验中，加入与滤液体积相等的、冷却的A溶液，静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物。上面的A溶液是指 体积分数为95%的酒精溶液。所以D正确。A、B、C不正确。

考点：本题考查教材中生物学实验的相关知识，意在考查考生能理解相关实验的原理和方法，把握材料和试剂的选择，熟练完成相关实验的能力。

14．B

【解析】

试题分析：DNA主要位于细胞核，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，因此不能用来作为提取DNA的材料，A错误；由于DNA和蛋白质等物质在氯化钠的溶解度不同，因此可以控制氯化钠的浓度来去掉杂质，用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质，用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质，B正确；用玻璃棒搅拌的目的是让DNA充分溶解，C错误；DNA不溶于酒精，而其它杂质溶解于酒精，故利用体积分数为95%的冷酒精来纯化DNA，D错误。

考点：DNA的粗提取和鉴定

15．C

【解析】

试题分析：兔的成熟红细胞无细胞核及细胞器，故不能用于提取DNA，A错误；PCR的每个循环一般依次经过变性-复性-延伸三步，B错误；DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝色产物，C正确；用甲基绿吡罗红试剂对人的口腔上皮细胞染色，细胞核呈绿色，细胞质呈红色，D错误。

考点：DNA的粗提取和鉴定；DNA、RNA在细胞中的分布实验；PCR技术的基本操作和应用

16．B

【解析】

试题分析：①PCR需要一对引物，即一对单链的脱氧核苷酸序列引物，①正确；

②PCR需要模板，即目的基因所在的DNA片段，②正确；

③需要脱氧核苷酸作为原料，③正确；

④核糖核苷酸是合成RNA的原料，而PCR合成的是DNA，④错误；

⑤采用PCR合成DNA时，不需要DNA连接酶，⑤错误；

⑥体外合成DNA时，需要DNA聚合酶，⑥正确；

⑦体外合成DNA时，不需要性内切酶，⑦错误．

考点：基因工程的原理及技术

17．D

【解析】

试题分析：DNA在2mol/L的NaCl溶液中溶解度较高，也溶于蒸馏水中，A项正确；向鸡血细胞液中加入蒸馏水，鸡血细胞会大量吸水，导致细胞膜和核膜破裂，释放出DNA，B项正确；DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，向溶解DNA的浓盐溶液中加蒸馏水是为了降低NaCl溶液的浓度使其达到0．14mol/L，从而析出DNA，C项正确；如果实验材料是植物细胞，在破碎细胞、获取含DNA的滤液前，需要先用洗涤剂溶解细胞膜，D项错误。 

考点：本题考查“DNA的粗提取与鉴定”实验的相关知识，意在考查学生能理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。

18．ABC

【解析】

试题分析：酒精在“微生物培养”中用于消毒，在“检测生物组织中的脂肪”中用于洗去浮色，A项正确；盐酸在“观察植物细胞有丝”的实验中与体积分数为95%的酒精按1:1混合配制成解离液，其作用是使组织细胞相互分离，在“探究pH对酶的活性”中的作用是提供酸性环境，B项正确；在“检测生物组织中的还原糖”的实验中，是利用 CuSO4和NaOH反应生成的Cu（OH）2与还原糖发生作用，在水浴（50～650C）加热条件下，生成砖红色的Cu2O沉淀，在“检测生物组织中的蛋白质”的实验中，实质上是在碱性条件下，Cu2+与肽键形成紫色的络合物，C项正确；蒸馏水在“提取纯净的动物细胞膜”和“利用鸡血粗提取DNA”中的作用都是使细胞吸水涨破，D项错误。

考点：本题考查“生物知识内容表”所列的生物实验的相关知识，意在考查学生能理解相关的实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。

19．C

【解析】

试题分析：：分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。所以C正确。A、B、D不正确。

考点：本题考查教材中生物学实验的相关知识，意在考查考生能理解相关实验的原理和方法，把握材料和试剂的选择，熟练完成相关实验的能力。

20．B

【解析】

试题分析：样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液，所以A正确；通过透析可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取，B错误；可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化，C正确；SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法是蛋白质纯化鉴定使用最多的方法，所以D正确。

考点：本题考查提取和分离血红蛋白的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理判断或得出正确结论的能力。

21．（1）1和2     染色体结构

（2）隐性   不能     黄绿色植株开花前死亡（无隐性纯合的成熟个体）

（3）黄绿色植株     能扩增出M基因片段

【解析】解：（1）由题意知，假若：与叶绿素合成相关的酶的基因（M基因）发生了基因突变，设用Aa×Aa表示，进行单株自交，产生子代的基因型为MM：Mm：mm=1：2：1，即子一代中叶片绿色：黄绿色=3：1，推测假说一符合题意．染色体片段丢失属于染色体结构变异，若为染色体片段丢失，设用MO×MO表示，进行单株自交，产生子代的基因型为MM：MO：OO=1：2：1，则也会出现子一代中叶片绿色：黄绿色=3：1的比例．

（2）若发生基因突变，根据题意，子一代中叶片绿色：黄绿色=3：1，黄绿色的突变植株应为隐性突变．由题意知，此变异植株因光合作用不足，在开花前死亡，故不能得到隐性纯合的成熟个体，所以不能进行测交实验进行验证．

（3）提取黄绿色植株的DNA，利用PCR技术进行特异性扩增，若能扩增出M基因片段，则证明假设2不成立．

故答案为：

（1）1和2     染色体结构

（2）隐性   不能     黄绿色植株开花前死亡（无隐性纯合的成熟个体）

（3）黄绿色植株     能扩增出M基因片段

22．

（1）高温使DNA分子热变性

（2）①催化脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 ②凝胶色谱 电泳

（3）①使血细胞破裂，释放出DNA分子 稀释NaCl溶液，使DNA分子析出 ②不能，哺乳动物成熟的红细胞中无DNA 分子

（4）一定的缓冲溶液 温度

（5）2 作为DNA复制的起点

【解析】

试题分析：

（1）PCR技术中用高温使DNA分子中的氢键打开,从而解旋。

（2）①在DNA分子复制中,TaqDNA聚合酶将两个脱氧核苷酸的脱氧核糖和另一脱氧核苷酸的磷酸连结形成磷酸二酯键。

②蛋白质的分离可以根据其分子大小和带电的性质和多少使之分离,即凝胶色谱法和电泳法。

（3）①在使用蒸馏水时,第一次使血细胞破裂,第二次使NaCl溶液浓度降低至0.14 mol/L。

（4）PCR反应是在一定的缓冲溶液中进行的,并需严格控制好温度条件。

（5）PCR中与体内DNA复制过程中的原料是完全相同的,并加入小段单链DNA或RNA作为引物,引导DNA复制,可以使游离的脱氧核苷酸与之结合形成磷酸二酯键,成为DNA复制的起点。

考点：本题考查PCR技术的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能运用所学知识与观点，形成知识网络的能力。

23．（1）纤维素酶和果胶酶

（2）叶绿体

（3）保持原生质体完整性      细胞壁

（4）双亲（或花椰菜和黑芥）      解离         漂洗

（5）1、2、4 （6）

（6）黑腐病菌

【解析】

试题分析：（1）过程①表示原生质体的制备，要用纤维素酶和果胶酶去掉植物细胞的细胞壁。

（2）用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，可通过观察叶绿体的有无作为初步筛选杂种细胞的标志。

（3）原生质体没有细胞壁的保护，需要加入适宜浓度的甘露醇以保证渗透压的稳定，以避免原生质体吸水或失水破坏原生质体的完整性；原生质体通过细胞壁杂声形成杂种细胞，进而形成愈伤组织。

（4）分析再生植株染色体变异类型，需要将再生植株细胞染色体和黑芥苗与花椰菜细胞中的染色片观察进行比较，制片的基本程序是解离、漂洗、染色、制片。

（5）根据图谱，花椰菜含有碱基对为300和600的DNA片段，黑芥还有碱基对为1000、1300和1500的片段，再生植株3，只含有长度为300和600的片段，与花椰菜一致，1、2、4既含有花椰菜DNA片段，又含有黑芥DNA片段，为杂种植株。

（6）对杂种植株接种黑腐病菌，能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株。

考点：植物细胞工程、细胞

24．

I

（1）兼性厌氧        呈酸性

（2）乙醇     乙醛     30℃～35℃

II．

（1） 去分化（脱分化）

（2）②当植物激素X与植物激素Y的浓度比大于1时 未分化细胞群分化形成芽

③当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时 未分化细胞群分化形成根

④生根 培养基中细胞素与生长素的浓度相等，而经光照后的幼苗芽尖处组织块含较多生长素，因此组织块处的细胞素相对较少，生长素相对较多，故诱导生根

III．（1）防止血液凝固 （2）．红细胞的洗涤 小分子可以自由进出透析袋（半透膜），而大分子不能通过 （3）相对分子质量大。

【解析】I．（1）酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧、呈酸性 的发 酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。

（2）醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。当缺少糖源时， 醋酸菌将        变为乙醇，再变为乙醛，该过程需控制的温度条件是30℃～35℃ 。

II．（1）植物组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化状态的过程称为去分化（脱分化）。

（2）据图分析，两种激素的不同浓度比与 形成芽、根、愈伤组织的关系：

①当植物激素 X 与植物激素 Y 的浓度比等于 1 时，未分化细胞群经形成愈伤组织；

②当植物激素X与植物激素Y的浓度比大于1时，未分化细胞群分化形成芽；

③当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时，未分化细胞群分化形成根；

④从理论上分析，分化的结果是生根；原因是培养基中细胞素与生长素的浓度相等，而经光照后的幼苗芽尖处组织块含较多生长素，因此组织块处的细胞素相对较少，生长素相对较多，故诱导生根。

III． （1）实验前取新鲜血液，要在采血器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。

（2）在对样品进行处理时，主要包括．红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析 等步骤。其中透析技术的原理是小分子可以自由进出透析袋（半透膜），而大分子不能通过。

（4） 利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离，基本原理是相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快。

【考点定位】果酒果醋的制作、植物组织培养、血红蛋白的提取和分离

25．（1）高压蒸汽    灼烧    C

（2）固定化酶

（3）分子量大的

（4）带电性质及带电量

（5）5′端    3′端

【解析】

试题分析：微生物培养的关键是无菌操作，常用的灭菌方法主要有灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌和干热灭菌等．从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布和筛选菌株．蛋白质的分离常用凝胶色谱法．

解：（1）实验室常用的灭菌方法主要有灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌和干热灭菌等．稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是土壤取样，称取10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液，进行梯度稀释，即依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度，涂布和筛选菌株．故选：C．

（2）固定化酶是指利用物理或化学方法将酶固定在一定的空间内的技术．

（3）利用凝胶色谱法，分子量大的蛋白质经过的路程较短，移动速度较快，会先洗脱出来．

（4）通过电泳法分离提纯蛋白质时，影响蛋白质迁移速率的因素是蛋白质分子的带电性质及带电量，分子大小和分子形状．

（5）DNA的复制方向总是从子链的5′端向3′端延伸．

故答案为：（1）高压蒸汽    灼烧    C

（2）固定化酶

（3）分子量大的

（4）带电性质及带电量

（5）5′端    3′端

考点：微生物的分离和培养；蛋白质的提取和分离．

26．

（1）食盐（氯化钠）    溶解DNA

（2）①2（1分）      ②破坏其中的蛋白质    ③具有较高的稳定性（或耐较高温度）

（3）析出DNA   DNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离   二苯胺

【解析】

（1） 进行DNA粗提取和鉴定时，步骤一中需加入一定量的洗涤剂和食盐（氯化钠）对洋葱组织进行处理，加入前者是为了瓦解细胞膜结构，加入后者的目的是溶解DNA，将搅拌和研磨后的物质进行过滤，即可得到含有DNA的滤液。

（2）步骤二是DNA纯化过程中的关键步骤，可以采用以下几种不同的方法：

①利用DNA在浓度为0.14 mol／L的NaCl溶液中溶解度最低可分离出DNA；若要再次提纯，需要将其溶解在2mol／L的NaCl溶液中。

②通常会向DNA粗提取物中加入嫩肉粉，由于嫩肉粉中含有蛋白酶，可破坏其中的蛋白质。

③由于DNA具有较高的稳定性（或耐较高温度），将得到的DNA粗提取物放在60～75℃水浴中保温10～15 min，则蛋白质被破坏，可得到纯度较高的DNA。

（3）由于DNA不溶于酒精，但酒精可以使蛋白质变性并与DNA分离，故步骤三中向滤液中加入DNA体积分数为95%的酒精的目的是析出DNA。得到纯净的DNA后，可利用DNA与二苯胺在沸水浴条件下发生显色（蓝色）反应，来对其进行鉴定。

【考点定位】DNA粗提取和鉴定

27．

（1）植物细胞的全能性（2分）      脱分化和再分化（2分）

（2） 细胞素（1分）      小（1分）

（3）二苯胺（1分）   蓝色（1分）    （Taq）DNA聚合酶（2分）  （中温）延伸（1分）

【解析】

（1）植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，选用青蒿嫩棱茎段作为外植体，因为其容易脱分化和再分化

（2）生长素和细胞素会影响细胞的分化方向，过程②为脱分化，过程③为再分化，前者比后者的比值小

（3）二苯胺可检测DNA，沸水浴呈蓝色，在PCR技术中，需用Taq酶，循环包括变性、复性和延伸过程。

【考点定位】植物组织培养和PCR技术

【名师点睛】本题主要考查了学生对植物组织培养和PCR技术的理解及运用。解决此题的关键是，两者都属于选修三的内容，如有条件，可进行试验，加强理解记忆。

（1）醋酸菌（2分）   毛霉（1分）    酵母菌（2分）

（2）先调PH值后灭菌（每空2分）     高压蒸汽灭菌 （每空2分）

（3）洗涤剂和食盐 （每空2分）

（4）完全未开放的 （每空2分）      激素的种类及其浓度配比（每空2分）

【解析】

（1）葡萄酒的制作离不开酵母菌。葡萄酒变酸，表面观察到菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖而形成。在腐乳制作的过程中，在一定温度、湿度条件下，毛霉生长繁殖于豆腐块表面，形成大量的菌丝，便形成一层细密的皮膜。泡菜坛内有时会长一层白膜，这是酵母菌大量繁殖的结果。

（2）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是先调PH值后灭菌；一般对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌．

（3）提取洋葱DNA时,要在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐 ,并进行充分地搅拌和研磨,待过滤后再收集研磨液．

（4）为了培育花粉植株，一般选择单核期的花药接种，为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。花药培养产生花粉植株中所使用的培养基主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。

【考点定位】传统发酵技术的应用、微生物的培养与应用、植物组织培养

29．（1）碱基互补配对原则    ①③⑤⑦

（2）RNA聚合酶

（3）2000    1999

（4）启动子   终止子

（5）4种脱氧核糖核苷酸    模板DNA

（6）扩大细胞贴壁生长的附着面积

【解析】

试题分析：分析题图：为该基因与其mRNA杂交的示意图，①～⑦表示基因的不同功能区，其中②④⑥为基因编码区的外显子；③⑤为基因编码区的内含子；①⑦为基因的非编码区．

解：（1）分子杂交的原理是碱基互补配对原则；β﹣珠蛋白基因编码区包括外显子（②④⑥）和内含子（③⑤），其中内含子（③⑤）能转录，但不能翻译，因此细胞中β﹣珠蛋白基因中不能翻译的序列是①③⑤⑦．

（2）转录需要RNA聚合酶的参与，该酶能识别和结合基因首端的启动子．

（3）决定β﹣珠蛋白基因的编码区有7000个碱基对，其中有1000个碱基对的序列不编码蛋白质，即该基因中有6000个碱基对的序列能编码蛋白质，以该序列的一条链为模板转录形成的mRNA含有6000个碱基，含有6000÷3=2000个密码子，由于终止密码子不编码氨基酸，因此该序列最多能编码1999个氨基酸．

（4）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间．

（5）PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、对干扰素基因特异的DNA引物对、TaqDNA聚合酶、4种脱氧核糖核苷酸和模板DNA．

（6）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制．通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以扩大细胞贴壁生长的附着面积，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．

故答案为：

（1）碱基互补配对原则    ①③⑤⑦

（2）RNA聚合酶

（3）2000    1999

（4）启动子   终止子

（5）4种脱氧核糖核苷酸    模板DNA

（6）扩大细胞贴壁生长的附着面积

考点：基因工程的原理及技术；遗传信息的转录和翻译．

30．（1）生理盐水    渗透（作用）原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）

（2）除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液

（3）凝胶色谱法

（4）带电性质以及分子大小、形状

（5）2  携带者具有一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质

【解析】

试题分析：（1）样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心．向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH=7．0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破）。

（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去小分子杂质。

（3）电泳利用了待分离样品中各种分子的带电性质以及分子大小、形状等的差异，而产生不同的迁移速度，实现各种分子的分离。

（4）由如图2可知携带者有2种血红蛋白，因为携带者具有（控制血红蛋白的）一对等位基因，可以控制合成两种不同的蛋白质。

考点：蛋白质的提取和分离下载本文