学习目标：
1、简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
2、简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。
3、认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
学习重点
1、体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
2、哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
学习难点
1、卵母细胞的采集和培养。
2、精子的采集和获能。
学习过程
| 知识点 | 观察与思考 | 归纳与结论 | ||
| 试管动物技术 | 思考：试管动物技术的概念 | 试管动物技术是指通过_______________并通过_________________________________________。 | ||
| 一、从试管牛说起 | 阅读P69，思考讨论：体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义 | |||
| 二、 体 外 受 精 | 1、卵母细胞的采集和培养 仔细阅读P70，思考讨论： (1) 卵母细胞的采集和培养的主要方法是什么？ (2)其它方法如何？ | (1)主要方法是： ___________处理，___________________，然后，从____________，直接与______________________。 (2)第二种方法：从刚______________________；第三种方法是直接从__________________，叫___________。需借助______________________。采集的___________，都要在体外经___________后，才能与___________受精。 | ||
| 2、精子的采集和获能 仔细阅读P71，思考讨论： (1)收集精子的方法有几种？各有什么具体要求？(2)精子的获能方法通常包括哪几种？具体操作如何？ | (1)A：___________，采用________的方法，模仿____________________________设计的装置，它能够满足_________________________________的要求，同时配有相适应的_____________________。B：_________，只适用于猪和犬等体型较小，易于控制的家畜。 C：___________，这种方法多用于野生或经济动物。 (2)在体外受精前，要对精子进行获能处理。对于啮齿动物、家兔和猪等动物的精子，一般采用___________，即将取自附睾的精子，放入__________________中，培养一段时间后，精子就可获能；对于牛、羊等家畜的精子常采用___________，即将精子放在____________________________________________。 | |||
| 3、受精 仔细阅读P72图3-14，思考受精过程 | 简单绘制“哺乳动物体外受精示意图”： | |||
| 三、胚胎的早期培养 | 仔细阅读P72-73，思考讨论： 1、哺乳动物胚胎培养液的成分如何？ 2、牛体外受精胚胎工厂化生产流程图 3、思考讨论：比较哺乳动物体内胚胎的形成、体外胚胎的发育各需要完成哪些环节？ | 1、精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入___________中继续培养，以检查__________________的发育能力。培养液成分较复杂，除__________和___________外，还需添加______________________等营养成分，以及___________等物质。当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向_____移植或___________。不同动物胚胎移植的时间不同。 2、绘制流程图： 3、体内胚胎形成需要经过：______________________、_________和___________；体外胚胎的发育需要完成：_____________、___________和________________。 | ||
1．中科院动物所和福州大熊猫研究中心合作，通过将大熊猫细胞核植入去核后的兔子卵细胞中，在世界上最早克隆出一大批大熊猫早期胚胎，表明我国大熊猫人工繁殖研究再次走在世界前列。下列描述与克隆无关的是( )
A.“复制” B.无性繁殖 C.组织培养 D.人类基因组计划
2．超数排卵的做法正确的是( )
A．口服促性腺激素 B．注射促性腺激素
C．口服或注射促性腺激素 D．以上方法均不正确
3．胚胎早期培养需要用液体培养基，此培养液的成分是( )
A．水、无机盐、维生素、激素、有机盐、氨基酸、核苷酸、血清等
B．蔗糖、水、无机盐、维生素、激素
C．蔗糖、水、无机盐、氨基酸、核苷酸、血清
D．水、无机盐、维生素、有机盐、淀粉等
4．下列关于屠宰场和“胚胎工厂”合建的说法正确的是( )
①可保证屠宰场的肉是鲜肉，防止实验过长，肉变质②有利于生产大量的胚胎和胚胎工程所需要的原材料 ③不够卫生，不能合建 ④从屠宰场废弃的卵巢中可直接获取卵细胞
A．①②④ B． ②④ C．①② D．③
5．下列关于培育试管婴儿的叙述，不正确的是( )
A．培育试管婴儿要进行体外受精过程 B．试管婴儿的发育场所主要在试管内
C．试管婴儿的发育场所主要在母体内 D．试管婴儿具有双亲的遗传特性
6．卵母细胞的采集之前，用_____________处理雌性个体，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，又叫______。收集精子的方法有______法、______法和______法等。
答案：促性腺激素 冲卵 假阴道 手握 电刺激
7．在体外受精前，要对精子进行获能处理。通常采用的方法有__________、___________两种，其中后者是将精子放在一定浓度的____________中，用化学药物诱导精子获能。
答案：培养 化学诱导 肝素或钙离子载体A23187溶液
8．胚胎发育到适宜的阶段时，将其取出向_____________或_____________。
答案：受体移植 冷冻保存
拓展题
9．以下是制定并研究设计的“试管牛”工厂化生产技术流程，其中正确的顺序是( )
①卵母细胞的采集和培养 ②精子的采集和获能
③画出“试管牛”工厂化生产技术流程 ④受精 ⑤胚胎的早期培养
A．①②③④⑤ B．①②④⑤③ C．①②④③⑤ D．①②⑤③④
10．哺乳动物胚胎的早期培养所用培养液成分一般都比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加___________、____________、__________、__________等营养成分，以及___________等物质。
答案：维生素 激素 氨基酸 核苷酸 血清
知识拓展：
何谓试管婴儿技术
“试管婴儿”是指分别将卵子与精子取出后，在体外 (培养皿中) 使其受精，并发育成胚胎后，再植回母体子宫内。因此，胚胎在体外培养的时间只有几天，最重要的目的是确定精卵能结合成功，并筛选好的胚胎植回母体，以增加怀孕成功的机会。
“试管婴儿”技术主要包括：
1．超排卵 2．卵泡监测 3．取卵手术 4．精卵体外处理 5．体外受精
6．胚胎的体外培养 7．胚胎移植
“试管婴儿”技术是一项高、精、尖技术，需要具备一组有经验及专门技术的人员，一定的仪器，必需的药品。“试管婴儿”费用包括药物费用及手术费用，由于促排卵的药品费用较高，卵子受精、胚胎发育所需外界条件高，所以做一例“试管婴儿”的费用也较高。因为每一名患者所用的药物剂量不同，所以每个做IVF的患者所需的费用也有所不同，一般来讲，年龄轻、卵巢反应性好的患者需要的费用较低，具体费用应向生殖医学中心的医生咨询。
“试管婴儿”的成功率是大家非常关心的一个问题，一般情况下，一对正常育龄夫妻每月的自然妊娠机率不超过27%，通俗一点，就是说每对夫妇不是每个月想要小宝宝都能得到的。同样“试管婴儿”也不是每个治疗周期都会成功，我所目前“试管婴儿”的成功率为37%，这一比例在国内居领先水平。国外好的辅助生殖中心“试管婴儿”的成功率一般为30～40%。
目前“试管婴儿”技术可帮助几乎所有类型的不孕症患者，但由于其费用较高，尚难以在国内普及，但我们认为如果存在需要进行“试管婴儿”技术助孕的特征，应及早来辅助生殖中心诊治，以提高其成功率。
胚胎冷冻保存
胚胎冷冻保存： 要建立胚胎库和长途运送胚胎，就需要解决胚胎冷冻保存问题。冷冻保存的方法大体可分为缓慢冷冻、快速冷冻、玻璃化冷冻三类。快速冷冻的主要操作过程如下：
1．冷冻液： 一般用加有10％～20％的胎犊血清(FCS)的杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)来配制，防冻剂可采用甘油或二甲亚枫(DMSO)等。也可用1摩尔浓度的甘油作为冷冻液。
2．冷冻： 将胚胎洗净后置于1摩尔浓度的甘油溶液中，在室温下平衡10分钟，用O．25毫升细管包装胚胎，用聚乙醇粉末封口。细管放人0℃冷冻仪，以1℃／分钟速度降温，－7℃诱发结晶(用在液氮中冷却的镊子夹细管含胚段上端1／3处)。随后将冷冻仪以0．5℃／分钟(O．3～O．8℃分钟)降至—30℃，投入液氮。
3．解冻： 于35℃水浴中解冻后，剪断封口，将胚胎回收于干燥洁净表面皿内；分别间隔5分钟，依次通过1摩、O．75摩、0．5摩、O．25摩的甘油磷酸盐缓冲液，最后通过10％胎犊血清--磷酸盐缓冲液洗2～3次，然后进行移植或体外培养。 下载本文
