Buffer RPE使用之前加入4倍体积的无水乙醇（11ul原液 + 44ul无水乙醇。
1、RNA样品用RNAase水补齐至100ul,然后加入350ul Buffer RLT，充分混匀。
2、向以上稀释的RNA液中加入250ul无水乙醇，用移液充分混匀，切记勿用离心机。随后立即进行步骤3。
3、将以上700ul样品液转移至吸附柱，（吸附柱放置于2ml收集管中），盖上管盖。以≥8000g转速离心15s，弃掉收集管中废液。
可选: 如果需要执行在吸附住上进行DNase消化，则需按如下步骤进行：
（1）向吸附柱中加入350ul Buffer RW1，盖上管盖，以≥8000g（≥10000rpm）转速离心15s。弃掉收集管中的废液。
（2）向70ul Buffer RDD中加入10ul DNase 1，混合颠倒离心管，短暂离心。
（3）对准吸附柱薄膜加入80ul DNase 1 混合液，室温放置15min。
（4）向吸附柱中加入350ul Buffer RW1，盖上管盖，以≥8000g（≥10000rpm）转速离心15s。弃掉收集管中的废液。
4、向吸附柱中加入500ul Buffer RPE,盖上管盖。以≥8000g转速离心15s，清洗滤膜。弃掉收集管中的废液。
5、重复操作4。
可选： 将吸附柱放置于新的2ml 收集管中。盖上管盖，以最大转速离心1min。
6、将吸附柱放置于新的1.5ml收集管中，对准吸附柱薄膜加入30-50ul RNase-Free Water 。盖上管盖，≥8000g转速离心1min，洗脱RNA。
7、如果想获得更高的RNA浓缩液（预期的RNA产量＞30ug），重复步骤6向吸附柱中加入新的30-50ul RNase-Free Water ，或者重新利用第6步洗脱的RNA液重新加入吸附柱中洗脱。重复利用第6步中的1.5ml收集管。下载本文
