2  范围： 本标准适用于Agilent 1260 LC高效液相色谱仪。

   3  责任： 检验室操作者。

   4  使用说明：

   4.1 开机

   4.1.1 更换待测样品所需的新鲜流动相； 

   4.1.2 打开计算机； 

   4.1.3 打开1260液相电源开关（从下往上依次按下电源按钮）。

   4.1.4 打开仪器的联机工作站（双击桌面快捷方式图标）。

   4.1.5 编辑方法：

   4.1.5.1 新方法编辑:进入工作站主界面后，单击“方法”菜单，选择“新建方法”，待系统建立方法完成后（5s左右），再单击“方法”菜单，选择“编辑完整方法”，选中除“ 数据分析 ”外（将“数据分析”前方框中的对号去掉）的三项，点击“确定” ，进入下一画面，方法注释里选择进样源：ALS，点击确定，进入下一画面：设置方法

流量：1ml/min

流动相：按《中国药典》规定比例设定；

停止时间：根据实际情况设定，不同样品不同时间；

进样器：标准进样，具体进样量根据《中国药典》规定设置；

TCC选项：恒温箱温度根据具体情况选择左侧或右侧进行设置（具体           温度根据《中国药典》规定设置）；

VWD选项：设定波长，峰宽：根据具体情况设定，一般情况下选择›0.1min(2s相应时间) 5Hz；

单击“方法”，选择“保存”，输入名称确定即可（保存时保留方法扩展符“M”）。

4.1.5.2 已有方法调用：单击“文件”菜单，选择“调用方法”，找出所需的方法，单击，确定即可。

4.1.6 系统运行：点击主界面的“开启”按钮，启动系统，系统中运行的是待测样品的流动相；

    4.1.7 排气：逆时针轻轻旋转仪器的Purge阀，在泵设置界面上右击，选择方法，在弹出的对话框中根据流动相选择所需的管道，设置流速进行排气（此时只对所需的管道排气），流速由高到低：0.1mL/min→1mL/min→2mL/min→3mL/min→4mL/min→5mL/min，等待2→3min，气泡排完之后先将流速设为1.0mL/min，再关闭Purge阀。

4.1.8 平衡色谱柱：排气结束后，流动相在相应的管道中运行，平衡色谱柱。

4.2 序列进样

4.2.1新建序列模板：

点击“序列”菜单下的“新建序列模板”，待序列模板建立后，点击“序列”菜单下的“序列表”，填写序列表：

样品瓶—填写样品瓶位置；

样品名称—填写样品名称；

方法名称—点击，出现下拉框，选择方法；

进样次数/瓶—填写每个样品瓶进样次数，一般标准样品为5针，样品为2针，冲机子为1针；

样品类型—选择样品类型：样品，标准样品、空白；

校正级别—在选择标准样品后，填写此瓶标准样品的校正级别；

称样量—一般单位为mg；

进样量—按《中国药典》规定设定，如空缺则为自动进样器设置进样量；

乘积因子—即为稀释倍数；

运行方法—保存样品信息并运行方法（保存是保留文件扩展符“S”）；

待柱子平衡好后（基线平稳后半小时左右），点击“运行控制”菜单下的“运行序列” ，即可对样品测定。

4.2.2 调用序列模板：

点击“序列”菜单下的“调用序列模板”，待序列模板调用后，点击“序列”菜单下的“序列表”，修改序列表。

4.3 数据的处理

4.3.1 点击“脱机”快捷方式，点击“数据分析”进入数据分析界面。 

4.3.2 从“文件”菜单中选择“调用信号…”选项，选中数据文件名，点击确定，或者在数据分析界面的左侧数据区将数据被调出，双击即可。

4.3.3 数据分析

4.3.3.1谱图优化

从“图形”菜单中选择“信号选项”；

从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间，手动输入 X、Y 坐标范围进行调整，点击“确定”。反复进行，直到图的显示比例合适为止，选中化合物的名称前的空白框，确定。

4.3.3.2 积分参数优化：

自动积分方法，从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，弹出积分界面，选择合适的“斜率灵敏度”（影响峰的起止点），“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击绿色的“F”图标，在不想要的峰前后各点一下，就可将杂质峰去掉，点击左边有绿色对号的图标图标，将积分参数存入方法 。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

4.3.3.3 校正：为“标准样品”建立校正曲线（工作曲线/标准曲线）选中“标准样品”，选择“校正->校正设置” ，将单位修改为“mg/mL”，双击第一针标准品数据，选择“校正->新建校正表”，填写“缺省含量”为标准样品浓度，点击确定，出现“校正表” 表格，在表格中“化合物”中填写化合物名称（标准样品名称），右侧“校正曲线”即可实时更新校正曲线图，并标注RSD和相关系数，双击第二针标准品数据，选择“校正->重新校正”，选择“平均->确定”，依次双击每一针样品数据，使每一针数据都校正，相应的峰上都标注好名称。最后，选择“方法->保存方法”，保存数据分析方法。

4.3.3.4 数据处理：调用样品数据文件后，选择“报告->设定报告”，在“定量”中选择“外标%”，选择“报告->打印报告”即可得到样品外标法含量，依次双击打开每一针图谱，对每一针的样品数据选择“报告->打印报告”，关闭打印窗口，就可以把样品含量计算出来。

4.3.4 设定报告格式并打印报告

选择“查看”将处理完的数据全部选中（摁住ctrl键，一次点击每一针数据），调用重叠报告模板，待模板数据显示后选择“打印报告”，即可。

4.4 关机

4.4.1 实验结束后，关闭检测器的灯关闭检测器的灯后冲洗系统，可以延长检测器灯的寿命。

冲洗管路冲洗系统：没有盐缓冲溶液的流动相，（反相系统）用95%有机相+5%水相冲洗系统和反相色谱柱或者适宜的流动相冲洗系统和反相色谱柱有盐缓冲溶液的流动相，（反相系统）用95%水相+5%有机相冲洗系统和反相色谱柱（反相系统），除去反相色谱柱与系统中的盐溶液。然后用95%有机相+5%水相冲洗系统和反相色谱柱，流速仍为1ml/min。

4.4.2 封存色谱柱：（反相系统）用95%有机相+5%水相，封存反相色谱柱，两端封死。（如长时间存放可将柱子完全侵泡有机相内，以防用纯有机相封存反相色谱柱，如果长期保存有机相会挥发）。

4.4.3 关闭电脑：将泵流速逐步降至0ml/min，单击“关闭”按钮关闭所有模块，退出化学工作站，关闭电脑。

4.4.4 关闭模块：关闭所有模块电源开关。

4.5  注意事项：

4.5.1 当Purge阀打开，流速设为5mL/min，系统的压力高于5bar时，注意更换泵的过滤白芯；

4.5.2 每次做完试验后，注意要清洗管路以及色谱柱，防止管路、脱气机及色谱柱的堵塞；

4.5.3 紫外灯定期检查，如有误差及时更换；

4.5.4 每次更换流动相后一定要更改溶剂瓶中流动相的体积；

4.5.5 若使用缓冲盐时，一定要将缓冲盐过滤并且现配现用，不用后将缓冲盐立即倒掉，不可将缓冲盐放在溶剂瓶中；同时将缓冲盐或水放在A和D通道，将有机溶剂放在B和C通道；

4.5.6 切忌用纯的乙腈去冲洗管路；

5  日常维护：液相色谱仪的管线和接头、经济型滤膜注射式过滤器、HPLC 在线过滤器、泵头密封垫清洗工具包、柱塞杆和密封垫、更换主动入口阀滤芯、带CTC 自动进样器的安捷伦液相色谱系统的自动进样器备件、多孔板、1100/1200 针头和针座、进样阀。下载本文