分布广、数量大、种类多、价格低廉的特点。如何充分利用这些资源而又使环境不受污染，是现代农业面临的难题[1]。农作物秸秆主要由纤维素、半纤维素和木质素三大组分组成，由于纤维素特别是木质素难以被分解，影响其利用推广。近几十年来，国内外
科研人员虽然研究了一些物理、
化学的秸秆利用方法，但都存在着利用不充分、
成本高等问题[2]。实践表明，秸秆的生物法利用是最佳途径，此法具有降解率高，安全环保，成本低等优点。
纤维素酶在充分利用农作物秸秆等农副产品废弃物，降解秸秆中的纤维素，开发新能源方面具
有巨大的应用潜力[3]，
目前，用于纤维素酶生产的菌株多为木霉、青霉及曲霉等[4]，但其产生的酶普遍存在活力较低的问题。筛选高效纤维素分解菌，确定纤维素酶的固态发酵工艺，是利用秸秆纤维素的关键。本试验从多种土样中，选出高活性纤维素分解菌株，并对其进行了初步鉴定。
1
材料与方法
1.1
材料
城郊农村采集不同地点土样，杂草地土样，发
霉的腐芦荟叶，内蒙古科技大学院内腐烂的树皮、树根，屠宰场取牛胃内物，等样品共20份。1.2培养基
1.2.1富集培养基K 2HPO 42g ，（NH 4）2SO 41.4g ，M gSO 4·7H 2O 0.3g ，CaCl 20.3g ，FeSO 4·7H 2O 5mg ，M nSO 41.6mg ，ZnSO 41.7mg,CoCl 22mg ，新华1号滤纸2g ，pH5.5，121℃灭菌30min 。1.2.2分离筛选培养基羧甲基纤维素钠（CM C-Na ）15g ，NH 4NO 31g ，酵母膏1g ，MgSO 4·7H 2O
0.5g ，
K 2HPO 41g ，H 2O 1000mL ，琼脂2%，pH 自然，121℃灭菌30min 。
1.2.3液体产酶鉴定培养基羧甲基纤维素钠（CM C-Na ）15g ，NH 4NO 31g,M gSO 4·7H 2O 0.05g ，KH 2PO 41g ，H 2O1000mL ，pH 自然，121℃灭菌30min 。1.3菌株的分离、纯化
1.3.1富集培养过程向各样品瓶中注入50mL 无菌水，玻璃珠充分振荡，灭菌纱布过滤，静置，取上清液1mL 接种于250mL 装有增殖培养基50mL 的三角瓶中。摇床210r/min 、28℃培养72h 。之后再将培养液转入无菌的新鲜增殖培养基中，反复培养3次，使菌富集。
1.3.2菌株的分离筛选移取富集培养液0.1mL 于CM C-Na 培养基上作平板涂布，菌体在28℃琼脂平板生长3d 后，每个平板倒入20mL 刚果红溶液（1mg/mL ）染色2h 后，加入适量1mol/L 氯化纳溶液洗涤，测量菌体和透明圈直径。
1.3.3CM C 液体摇瓶筛选选取透明圈、菌落直径比值较大菌落及滤纸生长的菌株进行产酶发酵试验。将菌体接种于CMC-Na 产酶鉴定培养基，28℃、170r/min 摇床培养5d 后测定羧甲基纤维素钠酶（CM Case ）活力。1.4酶活力测定
1.4.1酶液制备取培养5d 的发酵液10mL ，在
收稿日期：2009-07-21
基金项目：教育部春晖计划（Z2007-1-01020）、内蒙古自治区高等学校科学研究项目（NJzy08233）、包头市科技攻关项目（2008y1002-2）作者简介：季祥（1978-），男，硕士，讲师，从事生物质能、生物制浆研究。蔡禄（19-），男，博士，教授，从事生物质能、生物信息、分子生物学研究。
降解纤维素菌株的筛选和鉴定
季祥，蔡禄
（内蒙古科技大学生物工程与生物技术研究所，内蒙古包头014010）
摘要：从腐木、腐根、腐叶、腐草、土样、牛胃等样品中筛选获得11株降解纤维素的菌株，对其进行羧甲基纤维素钠平板培养基水解圈的测量，以及羧甲基纤维素钠酶活力的测定，获得1株活性相对较高的菌株，定名为CJ-3，并对其进行了分类学鉴定初步确定为单胞菌属，并对其进行了保存。关键词：纤维素酶；菌株筛选；鉴定doi:10.3969/j.issn.1008-1267.2010.01.013中图分类号：Q93-331
文献标志码：A 文章编号：1008－1267（2010）01-0034－02
第24卷第1期2010年1月Vol．24No．1Jan.2010
天津化工Tianjin Chemical Industry
菌株编号CJ-3KD-2NW-1CJ-2NW-2ZC-1CJ-1ZC-2LH KD-1KD-3
透明圈/菌落3.3022.8721.9201.8451.8421.4021.3801.3741.2541.1031.081
菌株编号CJ-3KD-2NW-1CJ-2NW-2ZC-1CJ-1ZC-2LH KD-1KD-3
CM Case 18.12.3719.125.2410.98
21.7516.082.457.5814.125.314℃、4000r/min 条件下离心15min 后，取上清液即
为粗酶液。
1.4.2CMCase 酶活力的测定取0.5mL 适当稀
释酶液，加pH 值4.8的醋酸钠缓冲液，
配制1%羧甲基纤维素钠1.5mL ，于50℃酶解0.5h ，加入2mL 的DNS 显色液于沸水浴5min ，冷却后在540nm 下测吸光值。
2
结果与讨论
2.1
刚果红平板筛选
20株菌株在羧甲基纤维素钠刚果红琼脂平板
上有11株菌株能够生长，表1为纤维素降解菌透明圈反映菌株基本生长情况。
从表1看出CJ-3和KD-2生长情况较好，透明水解圈较大。2.2酶活测定
11株菌株通过CM C-Na 培养基培养后的酶活力测定见表2
从表2可以看出菌株的变化较大，ZC-1、NW-1和CJ-3的CM Case 酶活力相对高一些。2.3菌株鉴定
我们对CJ-3菌株进行了初步的鉴定，通过形态学观察CJ-3菌株为长杆状、产芽孢、有鞭毛、能运动；菌落表面光滑、不透明，边缘不整齐呈丝状；
革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阳性，
V.P 反应阳性，能发酵葡萄糖、
阿拉伯糖、甘露醇产酸，能还原盐为亚盐，水解酪素及淀粉，不能利用丙酸盐，明显产生过氧化氢酶，不能分解卵磷脂，没有卵磷脂酶活性，在含7%的NaCl 培养基中能生长。参照
《伯杰氏细菌鉴定手册》[5]
初步鉴定该菌株为纤维单胞菌属（Cellulomonas ）。
3结论
本实验从当地取20份样品，经过初筛、划线培养得到11株可降解纤维的菌株，我们对11株菌株进行了水解圈的测定比较得出CJ-3和KD-2的生
长情况较好，
CMCase 酶活力的测定ZC-1、NW-1和CJ-3的CMCase 酶活力相对酶活较高，通过分析确
定对CJ-3菌株进行了初步的鉴定，
根据菌落形态，菌株的显微观察和生理生化特征初步鉴定该菌株为单胞菌属（Cellulomonas ）。
本实验得到的部分菌株已经进行了保存，以便将来的继续筛选，诱变作用，复合菌的联合作用以及基因工程等进一步研究。
参考文献：
［1］黄忠乾，龙章富，彭卫红，等.农作物秸秆资源的综合利用[J].资
源开发与市场，
1999，15（1）：32-34.［2］张木明，徐振林，张兴秀，等.预处理对稻草秸秆纤维素酶解产
糖及纤维素木质素含量的影响[J].农产品加工·学刊，2006，58（3）：4-6.
［3］陈子爱，邓小晨.微生物处理利用秸秆的研究进展[J].中国沼气，
2006，24（3）：31-35.
［4］刘颖，林亲录.纤维素酶制取与应用研究进展[J].中国食物与营
养，2006，4：33235.
［5］布坎南RE ，吉本斯NE.伯杰氏细菌鉴定手册[M].第八版，北京：
科学出版社，
1984.表1
纤维素降解菌透明圈
表2
纤维素降解菌CMCase 酶活力的测定
季祥等：降解纤维素菌株的筛选和鉴定第24卷第1期注意：作者投稿时，请写明详细通信地址、所在单位的科室、及本人的联系电话，以便及时联络。
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