用ＨＰＬＣ法测定鸡血藤膏中芒柄花素的含量

・成果应用・

徐菁周本宏。

（湖北中医学院药学院武汉４３００７１）

摘要：目的：采用高效液相色谱测定鸡血藤中有效成分芒柄花素的含量。方法：按高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一水（３３：６７）为流动相，检测波长２５０ｎｍ，柱温为３５℃，流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，进样量ｌｏ且ｌ，理论板数按芒柄花素峰计算应不低于５０００。结果：制剂中的辅料对主药测定无干扰。芒柄花素在进样量为０．０１０２５９９～０．５１２５ｐｇ（进样量１０ｐ１）范嗣内呈良好线性关系。精密度ＲＳＤ为０．２％，供试品溶液在１０小时内稳定。测得回收率平均值为９８．７３％，ＲＳＤ为０．２４％，表明方法回收率符合相关规定。结论：该法简便，迅速，准确，专属性强。

关键词：鸡血藤｝高效液相色谱法｝含量测定；有关物质

鸡血藤膏主要用于补血活血，舒筋活络，可治疗腰膝酸２．３对照品溶液制备

痛、肢体麻木、风湿麻痹、经闭、痛经、月经不调等【ｌｊ。本研究取芒柄花素对照品适量，精密称定，用甲醇制成５弘ｇ／ｍｌ采用高效液相色谱法测定其中一个有效成分芒柄花素的含的溶液，即得。

量，方法简便，迅速，准确，专属性强。供试品溶液制备精密量取本品２５“，用乙酸乙酯振摇ｔ燥试药与实验样品莘詈主鬻粪裂：篓斋黧筹鬈鬈翥篓

高效液相色谱仪ＤＩＯＮＥＸ液相色谱仪ＵＬＴＩＭＡＴ３０００；过，即得。

天平ＡＧｌ３５和ＢＳ２１０Ｓ（梅特勒一托利多）；紫外分光度计Ｕｖ－测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各５００（英国热电）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均１０“ｌ［引，注入液相色谱仪，测定，即得。

为分析纯。芒柄花素对照品（批号：１１１７０３—２００５０１）为中国药本品每ｉｍｌ含鸡血藤以芒柄花素（Ｃ１６Ｈ１２０４）计，不得少品生物制品检定所提供。于５嵋。

２方法与结果

２・４鸡血藤片中芒柄花素含量测定数据，见表１。

２．１色谱条件与系统适用性试验

３含量测定方法学考察

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一水（３３：６７）为流３．１方法依据

动相，检测波长２５０ｒｉｍ，柱温为３０℃，理论板数按芒柄花素峰按中华人民共和国药典２００５年版一部附录ⅥＤ。

计算应不低于３０００。３．２方法学考察

２．２方法３．２．Ｉ光谱扫描及检测波长的确定取芒柄花素对照品适按高效液相色谱法测定（中华人民共和国药典２００５年版量，用甲醇制成对照品溶液［３］，在紫外可见分光光度计上于一部附录ⅥＤ）。２００～４００ｎｍ扫描，最大吸收波长为２５０．Ｏｈｍ。

的实验研究．上海中医药，２００２，３６（Ｉｉ）；４０～２．

１４张煜，黄芸．银杏叶提取物预防心肌缺血再灌注损伤的研究进展国外医学心血管疾病分册，２０００，２６（４）：２００．

１５Ｃａｍｐｏｓ－ＴｏｉｍｉｌＭ，ＬｕｇｎｉｅｒＣ，Ｄｒｏｙ－ＬｅｆａｉｘＭＴ，ｅｔａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｙｐｅ４ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｂｙｒｏｌｉｐｒａｍａｎｄｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔ（ＥＣｂ７６１）ｄｅｃｒｅａｓｅｓａｇｏｎｉｓｔ－ｉｎｄｕｃｅｄｒｉｓｅｓｉｎｉｎｔｅｒｎａｌｃａｌｃｉｕｍｉｎｈｕ—ｎｌａｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄＶａｓｃｕｌａｒＢｉ—ｏｌｏｇｙ，２０００，２０：Ｅ３４～Ｅ４０．

１６ＺｈａｎｇＣ，ＺｕＪ，ＳｈｉＨ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｅｌｅｃｔｏｆｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔ

（ＥＧｂ７６１）ｏｎｈｅｐａｔｉｃｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｈｅｐａｔｉｃｍｉｃｒｏ－ｃｉｒ－ｅｕｌａｔｉｏｎｉｎＣＣｌ４ｒａｔｓ．ＡｍＪＣｈｉｎＭｅｄ，２００４，３２：２１～３１．

１７张锋，陈润芬，李惠丽，等．银杏叶提取物ＧＢＥＳ０对兔心肌组织ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－】【Ｌ基因表达的影响．中成药，２００５，２７（１）：６０～６２．

１８阳世光，姚新生，袁国会，等．银杏叶提取物防治兔心肌缺血再灌注损伤实验研究．中国煤炭工业医学杂志，２００２，５（５）：５１０～５１１．

１９张根葆，陈冬云，桂常青，等．银杏内酯Ｂ对缺血再灌注大鼠心脏保护作用的实验研究．中国中医药科技，２００５，１２（２）：９２～９４．

收稿日期：２００８－０８－１７

作者简介：徐菁（１９８０－），医学学士，武汉大学药学院２００４级研修班研究生，现工作于湖北中医学院药学院药物分析系。

＊武汉大学药学院

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３．２．２提取方法考察乙酸乙酯提取次数考察：分别取本品

２５ｍｌ，同正文方法提取，分别用乙酸乙酯提取３次，４次，５次，

６次，比较峰面积，结果见表２。

表１三厂家鸡血藤片中芒柄花素含量

厂家批号含量（ｕｇ／ｍ１）

李时珍药业２００６０８００１李时珍药业２００６０８００２李时珍药业２００６０８００２武汉中联药业０５０６００武汉中联药业０５０６１０湖北盛通药业２００６１１０１１．４８１１．５４９１．５５７０．５８３０．８０１１．２２１

湖北盛通药业２００６１１０２１．２２５结果表明，用乙酸乙酯提取５次可提取完全。

・７２２・３．２．３干扰试验供试品溶液制备：精密量取本品２５“，用乙酸乙酯振摇提取５次，每次２０ｍｌ，合并乙酸乙酯提取液，挥干溶剂，残渣加甲醇使溶解，转移至５ｍｌ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液制备：取芒柄花素对照品适量，精密称定，用甲醇制成５．１２５ｐｇ／ｍｌ的溶液，即得。

阴性对照溶液制备：取缺鸡血藤的阴性对照样品，照供试品溶液制备方法制备，即得。

吸取上述ｉ种溶液各ｌＯｕｌ，按含量测定方法进行测定，结果在阴性对照溶液色谱图中，在芒柄花素峰位置处无干扰色谱峰，见图１～３。

３．２．４线性关系取芒柄花素对照品适量，加甲醇制成系列浓度对照品溶液（，ｕｇ／ｍｌ：１．０２５、２．０５、５．１２５、１０．２５、２０．５、２５．６２５、５１．２５）。照含量测定项下测定峰面积［４］，测定数据见表３。

以芒柄花素浓度对峰面积进行线性同归，得回归方程：ｙ一１．０４Ｘ－－０．４０１，ｒ一１．０００，芒柄花素在进样量为０．０１０２５肛ｇ～Ｏ．５１２５ｐｇ（进样量１０ｐ１）范围内呈良好线性关系。见图４。

图１阴性样品色谱图图２供试品色谱图数理医药学杂志２００８年第２ｌ卷第６期

图３对照品色谱图

表３芒柄花素线性关系试验测定数据

峰面积

６０

５０

４０

３０

２０

１０

Ｏ

图４芒柄花素对照品线性关系图

３．２．５稳定性试验取供试品溶液（批号：２００６０８００１），照供试品制备方法供试品溶液。

按含量测定项下方法在０小时、１小时、２小时、３小时、５小时、８小时、１０小时进样进行峰面积测定【５】，见表４。测定结果ＲＳＤ为０．２％，供试品溶液在１０小时内稳定。

３．２．６重复性试验对同一批鸡血藤膏（批号：李时珍药业２００６０８００１），取６份，照含量测定方法进行测定，见表５。结果表明，该方法重现性良好。

范围选取低限４０％处做重现性和回收测定（样品：武汉中联药业０５０６００取样２０ｍ１），结果见表６。

选取限度的１倍处做重现性和回收率测定（样品：武汉中联药业０５０６００，取样８０ｍ１），结果见表７。

３．２．７回收率试验

取已知芒柄花素含量的鸡血藤膏（批号：李时珍药业２００６０８００１，含量为１．４８１ｕｇ／ｍ１）６份，每份２５．Ｏｍｌ，分别加入芒柄花素对照品４０．５ｕｇ，按含量测定项下测定，见表８。测得回收率平均值为９８．７３％，ＲＳＤ为０．２４％，表明方法回收率符合相关规定。

表４芒柄花素测定稳定性试验测定数据

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表５芒柄花素含量测定重复性试验测定数据

表７重现性和回收率测定

１４０２３．３６４５．２７８２２．５９７．４１

２４０２３．３６４５．３２７２２．５‘９７．６３９７．４００．２５

３４０２３．３６４５．２１９２２．５９７．１５

裹８芒柄花素回收率试验测定数据

４讨论

参考文献我们对标准品溶液在２００～４００ｎｍ范围内进行紫外扫描，

结果发现在２５０啪处有最大吸收，故选择此波长为检测波长。

１中华人民共和国药典委员会．中国药典．一部．北京：化学工业出版在试验中，曾选择以甲醇一水（６５：３５），乙腈一水（４５：５５），比

社，ｚ００５，２１２～２１３．

较发现，以正文中采用的乙腈一水（３３：６７）作为流动相的色谱分２胡芳弟，封士兰，赵键雄．ＲＰ－ＨＰＬｃ法测定红芪中两种异黄酮类成离度最佳，故采用。分的含量．中药材，２００３，２６（９）：６３４．本方法检测有效成分芒柄花素简便，迅速，准确，专属性３李伟东，阚毓铭．刺果甘草化学成分的研究．南京中医药大学学报，强。２００６。１６（４）：２２３～２２４．

４田薇，张大华，程型国，等．高效液相色谱／质谱分析抱茎獐牙菜提

取中的苷性成分．分析化学（研究简报＞，２００５，３３（９）：１２６５～１２６８．

５海力茜，张炬，徐建军，等．ＨＰＬＣ测定红芪中芒柄花素的含

量．华西药学杂志，２００５，２０（５）：４３３．

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