——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
| 仪器 | 规格(mL) | 数量 |
| 刻度试管 | 25 | 11 |
| 烧杯 | 100/250 | 6/1 |
| 锥形瓶 | 100 | 1 |
| 容量瓶 | 100\\250 | 4\\1 |
| 量筒 | 50 | 2 |
| 棕色瓶 | 1 | |
| 水浴锅 | 1 | |
| 离心机 | ||
| 天平 | ||
| 分光光度计 | 1 |
| 试剂 | 规格 |
| 葡萄糖标准液 | 1mg/mL |
| 3，5-二硝基水杨酸（DNS） | |
| 碘-碘化钾溶液 | |
| 酚酞指示剂 | |
| HCI | 6M |
| NAOH | 6M |
四、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作
2. 样品中还原糖和总糖的测定
（1）还原糖的提取
准确称取3.00g 食用面粉，放入100mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于4000r/min下离心5min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）总糖的水解和提取
准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1 滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH 中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。
（3）显色和比色
取4支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。下载本文
