实验材料：LightCycler Real Time PCR扩增仪，100，10，2μl移液，剪刀
1．使用时请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。另外，请不要使用振荡器混匀，剧烈振荡会降低制品性能。
以下操作请在冰上进行，长时间室温放置会降低制品性能。
2． 按下列组份配制PCR反应液（反应液配制请在冰上进行）。
一个组织：
①取0.5ml的离心管，加入水和模板
每个孔：（共6孔：3个内参，3个目地基因）
| dH2O（灭菌蒸馏水） | 3.2 μl |
| DNA模板 | 1 μl |
②取板，加入参照基因与目的基因的引物（画好相应的孔，小心加错）
| 肝 | 肠 | 肾 | 心 | 鳃 | ||||||||||
| GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH | GAPDH |
| C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 | C1q1 |
| C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 | C1q2 |
| C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 | C1q3 |
PCR Reverse Primer（10 pM） 等体积混匀（5 pM） 加入0.8μl
③加Mix（尽量避光）
Mix与①中的（水+模板）混匀，加入②中（混匀一个加6孔：三个目地基因，三个内参，9μl/孔，可以把板反过来，好加在对应的孔壁上）
每个孔要：
| SYBR® Green Realtime PCR Master Mix （2×） | 5.0 μl |
④贴膜（剪刀），放入袋内
⑤2000g离心1min，4℃保存至预约时间。
4． 使用Real Time PCR扩增仪，进行PCR扩增反应。
三步法PCR扩增反应（c1q3）:
95℃ 30秒 1 Cycle
变性：95℃ 5秒
退火：59℃ 10秒 40 Cycles
延伸：72℃ 15秒
5、 实验结果分析。
