214　样品含量测定　取正丁醇与盐酸(95∶5)混合液6m l置于具塞试管中,加入0.2m l硫酸铁铵溶液,另取3批样品,照“2.1.2”项下方法制备溶液,取1m l,加入上述试管中,与之混匀,于80℃加热20m in后,立即置冰水中冷却15m in后,于546nm波长处测定吸收度,代入回归方程计算样品中原花青素含量[2]。结果3批样品含量分别为标示量的102.8%、101.1%和9817%(n=3)。

215　加样回收率试验　精密称取处方比例80%、100%和120%的原花青素对照品,其他成分按处方100%比例模拟配制样品液各3份(共9份),按照“2.4”项下方法测定吸收度,并代入回归方程,计算含量,平均回收率为97.3%,RS D=1.3%,结果见表1。

表1　回收率测定结果(n=9)

序号对照品量

(mg)

测得量

(mg)

回收率

(%)

1 1.0170.962194.60

2 1.0170.988797.22

3 1.0170.979096.26

4 1.252 1.21797.20

5 1.252 1.21997.36

6 1.252 1.23698.72

7 1.512 1.48598.21

8 1.512 1.48798.35

9 1.512 1.48197.952.6　稳定性试验　取“2.1.2”项下供试品溶液,每隔15m in测定1次吸收度,结果在1h内稳定。

2.7　精密度试验　精密量取“2.1.2”项下供试品溶液1m l,共7份,按“2.4”项下方法测定,平均含量的RS D=2.00%。

3　讨论

311　原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单体的聚合物。原花青素本身无色,但经热酸处理后,显深红色,据此测定样品中原花青素含量。显色在1h内稳定。312　将正丁醇与盐酸按95∶5的体积比混合后,取出6m l置于10m l具塞试管中,加入1m l样品溶液,置沸水中加热40m in,再置冰水冷却,观察反应液颜色。若反应液呈无色或浅红色,则表明样品无干扰颜色;若反应液呈橙红色,表明有颜色干扰,可将样品溶液稀释后再测定,以尽可能减少黄色干扰。

313　本法专属性好、精密度高,方法回收率及稳定性均能满足测定要求,可用于越橘提取物中原花青素含量测定,能较好地对生产过程中半成品及成品进行质量监控,为中小企业及基层单位对其产品中越橘提取物进行质量分析提供参考。

参考文献

1　屠鹏飞,胡迎东,刘江云,等.越橘属植物的化学成分与开发价值.中草药,1996,27(9):565

2　向阳,马龙,苏德奇,等.比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量.中国公共卫生,2003,19(10):1128

高效液相色谱法与薄层色谱法

测定盐酸特拉唑嗪片有关物质的比较3

连潇嫣,任晓文

(天津药物研究院,天津　300193)

摘　要　目的:通过用高效液相色谱法(HP LC)与薄层色谱法(T LC)测定盐酸特拉唑嗪片中有关物质的相关实验数据,确定精确可行、适宜应用的检测方法。方法:HP LC法,色谱柱为Kr omasil C

18

(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸-二乙胺(350∶650∶10∶0.3),流速为1m l/m in,检测波长为246n m。T LC法:以硅胶GF254薄层板展开,醋酸乙酯-甲醇-二乙胺(40∶0.5∶3)为展开剂。结果:用T LC法测定,盐酸特拉唑嗪最小检出限为0.025mg/m l。用HP LC法测定,盐酸特拉唑嗪最低检测浓度为0.05μg/m l。结论:两种方法均可用于盐酸特拉唑嗪片中有关物质的测定。T LC法操作简单、方便。但HP LC法灵敏度更高,方法的最小检出限远低于T LC法,且定量更精确,适用于有关物质的检测。

关键词　盐酸特拉唑嗪片,高效液相色谱法,薄层色谱法,有关物质

中图分类号:R927.11　　　文献标识码:A　　　文章编号:100625687(2006)0620010204

3收稿日期:2006205219Co m para ti ve study on determ i n a ti on rel a ted subst ance of

terazosi n hydrochlor i de t ablets by RP-HP LC and T LC

L ian Xiaoyan,Ren Xiaowen

(Tianjin I nstitute of Phar maceutical Research,Tianjin300193)

ABSTRACT Object:To establish a method f or deter m inati on related substance of terazosin hydr ochl oride tablets by comparing RP -HP LC with T LC method.Methods:For HP LC method,the separati on was carried out on a Kr omasil C18colu mn(4.6mm×250 mm,5μm).The mobile phase was a m ixture of methanol-water-glacial acetic acid-diethyla m ine(350∶650∶10∶0.3).The fl ow rate was1m l/m in and the detecti on wavelenth was set at246n m.For T LC method,silica gel GF254was used as stati onary phase and a m ixture of ethyl acetate-methanol-diethyla m ine(40∶0.5∶3)as mobile phase.Results:The li m its of detecti on f or the assay were0.025mg/m l and0.05μg/m l for T LC and HP LC method,res pectively.Conclusi on:Both of the methods are rep r odurible.The T LC method is si m p le and convenient,but the HP LC method is more sensitive and accurate.

KE Y WO RD S terazosin hydr ochl oride tablets,HP LC,T LC,related substance

　　盐酸特拉唑嗪(teraz osin)为一新型长效抗高血压和治疗良性前列腺增生(BPH)症的药物,是美国Abbott公司80年代开发的一种长效选择性α1肾上腺素能受体阻滞剂[1]。本试验分别采用T LC[2]和HP LC 法[3]对盐酸特拉唑嗪片中有关物质进行测定,并进行比较。通过一系列相关实验数据分析两种方法的优点和缺点,找到更为精确可行,适宜广泛应用的方法。

1　仪器与材料

111　仪器　SPECT RASER I ES高效液相色谱仪(美国热电),包括SP8810泵,SPECT RASER I ES UV100检测器;ANAST R工作站;SH I M ADZ U UV-2550紫外可见分光光度仪(日本岛津);UV-CAB I N ETⅡ紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂)、硅胶GF

254

薄层板(青岛海洋化工厂分厂,规格10c m×10c m)。

112　材料　盐酸特拉唑嗪片(自制,规格:2mg/片,批号:050913,050914,050915),盐酸特拉唑嗪原料(北京第二制药厂,批号:050413),盐酸特拉唑嗪对照品(自制,纯度:99.5%),甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水(自制)。

2　方法与结果

211　高效液相色谱法

2.1.1　色谱条件与系统适应性试验　色谱柱:Kr o ma2 sil C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰醋酸-二乙胺(350∶650∶10∶0.3),检测波长:246 n m,灵敏度:0.01AUFS,流速:1m l/m in,柱温:30℃,进样量:20μl。理论塔板数按盐酸特拉唑嗪峰计算应不低于1000。盐酸特拉唑嗪峰与杂质峰的分离度均应符合要求。在本实验条件下,主峰保留时间约10 m in。

2.1.2　溶液的配制

2.1.2.1　供试品溶液　取样品,研细,精密称取细粉适量(约相当于盐酸特拉唑嗪1mg)置10m l量瓶中,加入流动相适量,超声使盐酸特拉唑嗪完全溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.1.2.2　对照溶液　取供试品溶液适量,加入流动相稀释制成每1m l中含0.002mg浓度的溶液,作为对照溶液。

2.1.2.3　阴性对照液　照处方量称取不含盐酸特拉唑嗪的空白辅料,照“2.1.2.1”项下方法制备,取续滤液作为阴性对照液。

2.1.3　检测波长的确定　精密称取105℃干燥至恒重的盐酸特拉唑嗪原料适量,加流动相稀释制成4μg/m l 的溶液,在200～400n m范围内作紫外全波长扫描,最大吸收为245.6nm,确定有关物质测定的检测波长为246nm。

2.1.4　辅料干扰试验　精密量取阴性对照液20μl,注入色谱仪,记录色谱图。结果表明,空白辅料不干扰测定。

2.1.5　破坏性试验　取本品,研细,精密称取细粉适量(约相当于盐酸特拉唑嗪1mg)分别置于5个10m l 量瓶中,分别加0.1mol/L盐酸溶液适量;加0.1 mol/L氢氧化钠溶液适量;加30%过氧化氢溶液适量,置100℃水浴中加热2h;另一份加水适量,置100℃水浴中加热2h;分别进行酸、碱、氧化和热破坏性试验。另取供试品溶液置于4500LX光下照射24h,进行光破坏性试验。照给定的色谱条件测定,结果在加热或光照射条件下,未见杂质产生;在酸、碱及氧化条件下有杂质产生,且盐酸特拉唑嗪降解产物与主峰分离良好,能够检测到降解产物,见图1。

2.1.6　最小检测限测定　在选定的色谱条件下,取对照溶液,加流动相倍倍稀释,配制不同浓度的溶液,分别进样20μl。结果盐酸特拉唑嗪最低检测浓度为0105μg/m l。

2.1.7　精密度试验　精密量取同一批供试品溶液,每次20μl,照给定的色谱条件连续进样测定6次。以归

一化法计算杂质,平均含量1.23%,RS D 为0.74%。

结果表明,方法精密度良好

。

图1　盐酸特拉唑嗪片辅料(A)对照品(B)

样品(C)光破坏(D )氯化破坏(E)加热破坏(F)

酸破坏(G)碱破坏(H)色谱图

2.1.8　线性关系试验　精密称取盐酸特拉唑嗪对照

品5mg,置25m l 量瓶中,加入流动相适量,超声处理使溶解,加流动相稀释至刻度。精密量取110、1.5、210、2.5和3.0m l,置10m l 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。制得浓度为0.050、0.075、0.100、0.125和0.150mg/m l 溶液,分别进样20μl,以峰面积(A )为纵坐标,以浓度(C )为横坐标,进行线性回归,得回归

方程C =1.073X ×10-6A +5.077×10-3

,r =0.9991(n =5)。结果表明,进样浓度在0.05～0.15mg/m l 范围内线性关系良好。

2.1.9　样品中有关物质的测定　取样品3批(050913,050914,050915),分别照“2.1.2.1”项下方法制得供试品溶液。精密量取供试品溶液适量,照“2.1.2.2”项下方法配制对照溶液。取供试品溶液和对照溶液各20μl 注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍,采用自身对照法计算杂质总量。结果有关物质含量分别为1.35%、1.42%和1.29%。表明3批样品有关物质测定,杂质含量不超过2%。212　薄层色谱法2.2.1　层析条件　点样于硅胶GF 254板上,以醋酸乙酯-甲醇-二乙胺(40∶0.5∶3)为展开剂,展开后晾干,置紫外光(254nm )下检视。2.2.2　溶液的配制2.2.2.1　供试品溶液　取本品细粉适量(约相当于含主药25mg ),加甲醇5m l,振摇,超声处理5m in,3500r/m in 离心30m in,取上清液滤过,续滤液作为供试品溶液(浓度为5mg/m l )。2.2.2.2　对照溶液　精密量取供试品溶液适量,加甲醇稀释成每1m l 含100μg 的溶液,作为对照溶液。2.2.2.3　阴性对照溶液　称取不含盐酸特拉唑嗪的空白辅料,照“2.2.2.1”项下方法配制,取续滤液作为阴性对照液。2.2.3　辅料干扰试验　取阴性对照溶液5μl,点于硅胶GF 254板上,以醋酸乙酯-甲醇-二乙胺(40:0.5∶3)为展开剂,展开后晾干,置紫外光(254n m )下检视。结果未见斑点,表明辅料对盐酸特拉唑嗪片中有关物质没有干扰。2.2.4　最小检测限测定　取供试品溶液,加甲醇倍倍稀释成每1m l 中含0.10、0.05、0.025、0.010和0.005mg 的溶液,量取5μl,分别点于同一硅胶GF 254板上,展开后晾干,置紫外光灯(254nm )下检视。结果表明,盐酸特拉唑嗪的检测限在0.025mg/m l 以下。2.2.5　精密度试验　量取供试品溶液5μl,分别点6次于同一硅胶GF 254薄层板上,展开后,晾干,置紫外光

灯(254nm )下检视。结果表明重现性良好。

2.2.6　样品有关物质测定取“2.2.2.1”和“2.2.2.2”项下的供试品溶液及对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版二部附录V B )试验,吸取上述溶液各5μl,点于同一硅胶GF 254板上,以醋酸乙酯-甲醇-二乙胺(40∶0.5∶3)为展开剂,展开后晾干,置紫外光(254质nm )下检视。盐酸特拉唑嗪主斑点与杂质斑点能完全分离,并且供试品溶液杂质斑点色深小于对照溶液主斑点色深,见图2

。

1.空白辅料

2.对照

3.050913

4.050914

5.050915

图2　样品中有关物质T LC 色谱图

3　讨论与小结311　流动相的选择　盐酸特拉唑嗪为一种有机弱碱的盐酸盐,在甲醇中溶解,在水中略溶。采用甲醇-水为流动相洗脱时,峰形差,所以在流动相中加入一定的

缓冲离子,维持一定的pH 值,以改善峰形。另经试验发现,分离出的各杂质及主峰对甲醇与水比例的改变,其相应保留时间的改变程度各不相同。通过各种比例的调整,以甲醇-水为35∶65时,各杂质及主峰分离良好,且主峰的保留时间适中。312　层析条件的选择　根据盐酸特拉唑嗪的理化性质,选择了一系列展开系统,发现乙酸乙酯-甲醇系统,盐酸特拉唑嗪可以展开,但拖尾严重。加入二乙胺后,拖尾明显改善。最后,以乙酸乙酯-甲醇-二乙胺(40∶0.5∶3)展开时,杂质斑点与主斑点能很好的分离,且Rf 值在0.2～0.8范围内。在本试验条件下,两种方法检测3批样品的有关物质的量均小于2%,结果一致。T LC 法简单,操作方便,适于生产中半成品的杂质检查;HP LC 法设备要求较高,但灵敏度高,定量准确,更适用于成品的杂质检查。HP LC 法测定盐酸特拉唑嗪片有关物质,其最小检测限明显低于T LC 法。且经破坏试验结果显示,主峰与各杂质峰分离度好,专属性强,精密度高,因此HP LC 法更适用于有关物质的检测。

参考文献

1　刘永刚,卓海通,董家富,等.盐酸特拉唑嗪胶囊人体生物利用度及药

物动力学研究.中国医院药学杂志,1998,18(12):531

2　中国药典.二部.2005.附录273　中国药典.二部.2005.附录28

HP LC 法测定抗纤丸中黄芩苷的含量

3

王俊华,魏智勇,满姗姗

(天津市传染病医院,天津　300192)

摘　要　目的∶采用高效液相色谱法测定抗纤丸中黄芩苷的含量。方法∶采用Phenomenex C 18色谱柱,流动相为甲

醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1.0m l/m in,检测波长为280n m.结果∶黄芩苷在0.1～1.0μg 范围内呈良好的线性关系,r =0.9995,平均回收率为99.82%,RS D 为1.76%(n =5)。结论∶本法操作简便,重现性好,可用于抗纤丸的质量控制。

关键词　抗纤丸,黄芩苷,HP LC 法,含量测定

中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A 　　　文章编号:100625687(2006)0620013203

D eter m i n a ti on of ba i ca li n i n Kangx i a n p ills by HP LC

W ang Junhua,W ei Zhiyong,M an Shanshan

(Dep t .of Phar macy,Tianjin I nfecti ous Hos p ital,Tianjin 3000192)

ABSTRACT Object:To establish an HP LC method for deter m inati on of baicalin in Kangxian p ills .Methods:The separati on was perfor med on a Phenomenex C 18colu mn with methanol -water -phos phoric acid (47∶53∶0.2)as mobile phase .The fl ow rate was 1.0m l/m in and the detecti on wavelength was set at 280n m.Results:The linearity was obtained within a range of 0.1～1.0

3收稿日期:2006205216下载本文