ＥＤＩＢＬＥＦＵＮＧＩＯＦＣＨＩＮＡ
ｃＮ５３一１０５“ＱＩｓｓＮ１００３—８３１０姬松茸抑菌作用的初步研究
戴肖东１、２，张介弛２，孔祥辉２，李一经“
（１．东北农业大学动物医学学院，哈尔滨１５００３０；２．黑龙江省科学院应用微生物研究所，哈尔滨１５００１０）
摘要：采用双平板法和比浊法，测定了姬松茸片厦水提取液的押制作用厦书提液的最低抑茵浓度。姑果表明，姬松茸
子实体片剂度水提取液对于３种受试茼均有押制作用。提取物对于金黄色葡萄球茴、绿脓杆茵、大腑杆８ｈ最低押茵
琅度分别为２５ｍｇ·ｍＬ．１、５０ｍｇ·ＩｌｌＬ＿。、５０ｌＩｌｇ·ＩＩｌＬ一；１８ｈ最低押茵浓度为５０ＩＩｌｇ·ｌＩｌＬ～、１００Ｉｌｌｇ·ｍＬ～。
关键词：姬格茸；抑茸作用；最低却茵采度
中田分类号：ｓ６４６．９文献标识码：Ａ文章编号：１００３—８３１０（２００７）０６—００∞一０２
姬松茸（＾弘啦ｗ６妇ｉＭｕｒＬ）原种引自巴西，商品名又叫巴西蘑菇…。属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、蘑菇（黑伞）科、蘑菇（黑伞）属。是一种珍稀的食药兼用真菌。姬松茸不仅味道鲜美，营养丰富，而且含有蛋白质、多糖、甾醇等多种活性物质“Ｊ，在降血压、血脂、血糖和胆固醇，特别是免疫调节及抑制肿瘤方面具有很好的功能”。ｊ、。在日本被誉为。奇迹的蘑菇”。近年来国内外对于姬松茸的药用及保健功能进行了较为深入的研究，并开发出一些新的功效。有关姬松茸抑苗作用的研究少有报道，本试验在姬松茸对３种具有代表性的病原菌的抑制作用进行了初步的研究。以期证实姬松茸在抑菌方面的功效。
１材料与方法
１．１材料
１．１．１供试样品姬松茸干子实体和姬松茸片Ａ（姬松茸含量２００ｍｇ·片～，直径６．Ｏｍｍ）由黑龙江省科学院应用微生物研究所生产；姬松茸片Ｂ（姬松茸含量１７０ｍｇ·片～，直径７．ｏｍｍ）由日本株式会社应微研生产。
１．１．２供试菌种金黄色葡萄球菌２５９２３（曼ｄ叫吼１）、绿脓杆菌２７８５３（Ｐ棚晒加ｓｄ）、太肠杆菌２５９２２（Ｅ枷），以上标准株由黑龙江省科学院应用微生物研究所医药研究室提供。
１．１．３培养基ＬＢ培养基：蛋白胨１０９、酵母提取物５９、氯化钠１０９、琼脂粉１３９，水ｌ０００ｍＬ，ｐＨ７．０—７．２。
１．２方法
１．２ｌ姬松茸水提取物的制备
姬松茸干子实体５０９，粉碎后加１５０ｍＬ蒸馏水，９０℃水浴提取１．５ｈ，３０００ｒ·ＩＩｌｉⅡ－１离心１０ｍｉｎ，取出上清液．沉淀再次加入１００ｍＬ蒸馏水提取１．５ｈ，共提取３次，合并上清液并浓缩至５０ｍＬ（相当干含原生药１．０９·ｍＬ一），灭菌备用。１．２．２菌悬液的制备”１
将供试菌株接种于ＬＢ液体培养基中，３７℃条件下振荡培养１８ｈ，吸取菌液用灭菌生理盐水稀释调整为０．５个麦氏比浊单位（约为１．５ｃＦｕ·ｍＬ一×１０８ｃＦｕ·ｍＬ一），用血细胞计数板计数将悬液调整为１×（１０５ｃＦｕ·ｍＬ～一１０６ｃＦｕ·ｍＬ叫），备用。
１．２．３双平板的制备…。
取直径约９０ｍｍ、高１６啪的平皿，注人加热融化的ＬＢ固体培养基２０ｍＬ，在底内均匀推平，放置水平台上使凝固．
作为底层。另取培养基５ｍＬ加热融化后，放冷至５０℃，加入稀释后的实验菌悬液ＯｌｎｌＬ，摇匀，在底层上均匀摊布，作为菌层。冷却后，在部分平板中等距离均匀安置牛津杯．覆盖备用。
１．２４抑菌实验
将实验药物分成药物原液、１／２浓度、１／５浓度、１／１０浓度、１／２０浓度等５种浓度，每个牛津杯中滴人药物０．２“ｌＬ；姬松茸片直接等距离放置在未加牛津杯平板的菌层上。３７℃恒温培养１８ｈ，测量抑菌圈直径。
１．２．５提取液最小抑菌浓度（ＭＩｃ）的测定”１
用ＬＢ液体培养基将药液稀释５倍（即药液浓度为２００ｎｌｇ·ｍＬ一），再按２倍比稀释法用ＬＢ液体培养基稀释５个稀释度，得６种不同浓度即２００ｎＩｇ·ｍＬ一、１００Ｊｎｇ·ｍＬ～、５０ｍｇ－ｍＬ～、２５皿曙·ｍＬ～、１２．５皿嘱·ｍＬ～、６．２５ｍｇ·ⅢＬ“提取液系列。每支试管分装１０ｍＬ，每浓度３管重复，然后将上述盛有药液与培养基混合物的试管在Ｏ．０８ＭＰａ高压灭苗２０ｌＩｌｉｎ后．分别接种１００山的菌悬液。以不加提取液的ＬＢ培养基接菌后作阳性对照，同时每个浓度设置不加菌悬液的阴性对照。接菌后置于３７℃的恒温水浴中振荡培养，分别于８ｈ和１８ｈ在７２１分光光度计上６加ｎｍ处测定各处理的吸光度值，观察细菌的相对生长情况。当实验组ＯＤ值小于阳性对照的ＯＤ值时说明有抑菌作用，二者ＯＤ值相同的最低浓度即为提取液的最低抑菌浓度（ＭＩｃ）。
２结果与分析
２．１姬松茸片抑菌作用
表１姬松茸片的抑苗结果（抑菌瞳平均直径／ｍｍ）
注：“一”没有抑苗腰。
表１结果显示，２种剂型的姬松茸子实体片在涂有３种菌的平皿上均产生抑菌圈，说明以姬松茸粉为主要原料的菇片对于３种菌都有一定的抑制作用；而以辅料做对照的药片没有抑菌罔产生，则证明其抑菌作用是由姬松茸所产生的。各组中，姬松茸片＾的抑菌圈相对大于姬松茸片Ｂ，说明２
·通讯作者：李一经，男，教授，博导，研究方向预防兽医学。Ｅ—ｍａｉｌ：刊ｉｎ—ｉ＠１６３．咖收稿日期：２００７—０５—１３第２６卷第６期戴肖东，等：姬松茸抑苗作用的初步研究
种药片的抑菌效果可能与有救抑菌成分的含量有关系。２种药片对于金黄色葡萄球菌抑菌效果好于其他２株菌，抑菌圈清晰，大肠杆菌抑菌圈虽大于绿脓杆菌，但不够清晰。
幺２姬松茸子实体水提取物抑菌效果
袁２姬松茸水握职驹抑菌结果（抑菌圈平均直径／ｍｍ）
表２表明，姬松茸子实体水提取物在涂有３种菌的平皿上均产生抑苗圈，说明水提取物对于３种菌都有一定的抑制作用．可以看出随浓度的降低抑菌圈相应的减小；与姬松茸片相同．水提取物对于金黄色葡萄球菌的抑菌效果好于其它２种菌．但是水提物的抑菌圈没有姬松茸片明显。
２．３提取液抑菌最低抑菌浓度
衰３水提取物最低抑菌旅度测定（平均ＯＤ值）
表３结果显示，姬松茸水提物对于３种菌抑制效果，因培养时间不同而异，随培养时间的延长其最低抑菌浓度变太。金黄色葡萄球菌在培养８ｈ时。大于浓度２５ｍｇ·ｍＬ“组的ＯＤ值明显小于阳性对照组的０Ｄ值。说明培养基中菌的含量低于对照，最低抑菌浓度为２５ｍｇ·ｍＬ一；培养１８ｈ时，浓度大于５０ｍ昏ｍＬ“的ＯＤ值明显小于阳性对照组的ＯＤ值，说明最低抑菌浓度为５０ＩＩ｜ｇ·ｍＬ～；同样绿脓杆菌培养８ｈ时，最低抑菌浓度为５０ｒＩＩｇ·ｍＬ～．１８ｈ最低抑菌浓度为１００ＩＩＩｇ·ＩＩＩＬ～；大肠杆菌培养８ｈ时，最低抑菌浓度为５０ｍｇ·ＩｎＬ～，１８ｈ最低抑菌浓度为１００。ｌｌｇ·ｍＬ～。经过长时间培养后，３种菌在提取液物度为２００ｍｇ·ｍＬ“的培养基中，始终保持极低浓度，其抑菌效果最为明显。．
３讨论
植物和真菌的作为天然的防腐剂极具开发前途。对于植物抑菌作用的研究进行得比较广泛，有关大型真菌的抑菌作用的报道还很少。谭敬军”ｏ、檀东飞等…１研究竹荪对食品中主要致病细菌抑菌作用，结果发现．竹荪对受试菌均有抑制作用，对食物起到很好的防腐效果；王新风等””研究证明富硒平菇也具有抑菌作用，且抑菌效果好于普通平菇；孙博光等…ｏ研究表明，茯苓对７种受试细菌均有抑制作用，为大型真菌抑菌作用的开发提供了科学依据。
本实验表明，姬松茸片和提取物对于３种病原茁都有一定的抑制作用，与叶竹秋等””的报道有相同之处。提取泣对于３种菌都有不同的最低抑菌浓度，但其最低抑菌浓度与菌的培养时间有关。随着培养时间的延长，抑菌浓度相应的变大，而高浓度姬松茸在整个培养过程中都具有明显的抑菌效果。在姬松茸作为抗菌功能以外保健食品或药品时，应该考虑到对体内有益菌群的抑制作用，适当的使用剂量。
姬松茸子实体片和水提取液对于金黄色葡萄球菌的抑制作用比大肠杆菌和绿脓杆菌明显．说明对于革兰氏阳性菌的抑制效果好于革兰氏阴性菌。姬松茸可能因产地或栽培方式的不同其抑菌作用略有差异，其抑菌成分和抑菌机理尚待进一步研究。
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ｃｏ肿ｅｎｔ雠ｉ叫
姬松茸抑菌作用的初步研究
作者：戴肖东， 张介弛， 孔祥辉， 李一经， DAI Xiao-dong， ZHANG Jie-chi， KONG Xiang-hui， LI Yi-jing
作者单位：戴肖东,DAI Xiao-dong(东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030;黑龙江省科学院应用微生物研究所,哈尔滨,150010)， 张介弛,孔祥辉,ZHANG Jie-chi,KONG Xiang-hui(黑龙江省
科学院应用微生物研究所,哈尔滨,150010)， 李一经,LI Yi-jing(东北农业大学动物医学学
院,哈尔滨,150030)
刊名：
中国食用菌
英文刊名：EDIBLE FUNGI OF CHINA
年，卷(期)：2007，26(6)
引用次数：0次
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1.学位论文赵扬帆姬松茸酚类物质的提取及其功能学的研究2008
姬松茸属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、蘑菇科、蘑菇属，是一种珍稀的食药兼用菌。姬松茸具有丰富的营养价值以及特殊的药用保健功效。本项目研究了姬松茸酚类物质的提取工艺，研究姬松茸酚类物质的抗氧化能力及其抑菌活性；并且通过高效液相法对姬松茸酚类物质有效成分进行化学成分分析。研究成果为开发利用姬松茸酚类物质提供了理论依据。 (1)以姬松茸干品为原料，研究溶剂提取姬松茸酚的最佳工艺。分别以水和乙醇为提取溶剂，考虑不同因素对提取效率的影响，如溶剂浓度、浸提温度、料液比、浸提时间和浸提次数等；并在单因素实验的基础上进行正交实验，对提取工艺进行了优化。试验结果表明，水提法提取姬松茸酚类物质的最佳工艺参数为：以1:30的料液比，在90℃水浴中浸提3次，每次处理3小时，姬松茸酚提取率为1.584％；醇提法提取姬松茸酚类物质的最佳工艺参数为：80％的乙醇-水混合溶液以1:25的料液比，在60℃水浴中浸提3次，每次处理2小时
，姬松茸酚提取率为2.138％。乙醇法提取率较水提法提取率高出35％。组织定位实验结果表明，姬松茸菌伞部位酚含量较菌柄部位酚含量高出36％。此外，研究了超声波强化提取对姬松茸酚提取率的影响以及微波在姬松茸酚提取中的应用，结果显示超声波能够提高姬松茸酚的水提取得率。 (2)采用超临界CO2流体萃取技术，研究超临界萃取姬松茸酚的最佳工艺。对影响超临界CO2萃取酚类物质的各种因素进行了单因素试验研究，并优选指标进行正交试验研究，得到较适宜的萃取工艺条件为：夹带剂为60％乙醇，萃取温度75℃、萃取压力40MPa、CO2流量为20L/h、夹带剂用量120mL。然后再进行了动态萃取与静态萃取的比较，得出先静态萃取1h后再动态萃取1h，萃取率最高，酚类物质的得率达2.431％。超临界流体CO2萃取较优化后的乙醇浸提法姬松茸酚得率高出14％，且夹带剂用量少，萃取时间短，萃取效率高。 (3)以茶多酚为对照，采用Fenton反应研究姬松茸酚对·OH的清除作用
；采用邻苯三酚自氧化法研究姬松茸酚对·O2-的清除作用。结果显示：在试验浓度范围内，姬松茸酚对·OH自由基和·O2-自由基具有一定的清除能力；在浓度相同的情况下，姬松茸酚对·O2-自由基的清除能力比对照组茶多酚强，但对·OH的清除能力却比茶多酚弱。同时，对姬松茸酚抗油脂自动氧化的能力进行初步研究，结果显示，姬松茸酚具有一定的抗油脂氧化活性。 (4)以茶多酚为对照，研究了姬松茸酚的抑菌作用。结果表明：姬松茸酚对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌三种菌种均有抑制作用，但对试验用的绿木霉和黑霉两种真菌抑制作用不明显。在一定温度内处理不影响姬松茸酚的抑菌活性。姬松茸酚对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为6mg/mL，对大肠杆菌的最低抑菌浓度为3mg/mL，对枯草芽孢杆菌的最低抑茵浓度为4mg/mL。 (5)利用高效液相法对姬松茸酚有效成分进行化学成分分析，在色谱条件为柱温30℃；反相C18柱；运行130min；流速1mL/min；检测波长260nm下，进行甲醇-水变梯度洗脱；可较好地分析姬松茸酚类物质中的各成分，并从中分离出绿原酸。
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