1、植物组织培养成功与否，一方面取决于培养材料本身的性质；另一方面取决于培养基的种类和成分。

2.一个已停止的成熟细胞转变为____分生______状态，并形成___细胞团_______的现象称为"脱分化"。

3植物组织培养技术的三大难题分别为褐变、污染和玻璃化。

4具有防止褐变作用的维生素是_____维生素C____。

5病毒在植物体内的运转方式有短距离运转和长距离运转两种，前者经过胞间连丝向邻近细胞中扩散，速度很慢。后者通过寄主植物韧皮部的疏导组织随着营养输送进行转移，速度很快。

6、6-BA / NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进_____根_____的生长，这时___分化_____占主导地位；比值高促进__苗___的生长，这时____占主导地位；悬浮培养的材料必须达到悬浮培养物质分散性多、细胞核较小均一性好和生长迅速等三个要求。

7、连续培养是指在培养过程中，以不断抽取用过的培养基并注入新鲜的培养基，使培养不断得到养分补充，保持其稳定状态的培养。

8．培养基的母液一般是配成大量元素，微量元素，维生素和＿氨基酸＿４类存放备用。ＭＳ培养基中组成大量元素的盐类分别是＿钾＿和＿铵＿。

9．一般情况下，细胞/生长素的比值高，有利于愈伤组织长＿芽＿，比值低有利于长＿根＿。

10．在植物的材料灭菌中，酒精的浓度用70%~75%，处理时间一般在几秒至几十秒范围，是靠_使蛋白质凝固_杀菌的；升汞的浓度一般用1%~2%，处理的时间在5~10min范围，升汞是靠_Hg2+_杀菌的；杀菌剂中的次氯酸钠是靠_ClO-_杀菌的。11．培养植物适宜的温度大多在＿25±2℃＿，光照强度在＿1000lx＿，光照时间在＿16h＿。

12、进行热处理植物脱毒的温度在__85℃___左右。

13、配制螯合态铁盐需要的成分是__FeSO4·7H2O__和_Na2-EDTA_。

14、培养基中有机态N素营养主要是硝态氮和铵态氮。

15、原生质体的融合可实现_体细胞_的杂交，其融合的方式分为_自发融合_和_诱导融合__两类。

16、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生单倍体植株，胚培养通常产生二倍体植株，胚乳培养通常产生三倍体植株。

17.进行植物组织培养最基本的前提条件是配置培养基。

18.离体叶片在诱导愈伤组织的培养基上培养，一般从叶缘或叶脉处容易发生愈伤组织。

19.某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行高压蒸汽灭菌，而要进行过滤方法除菌。20配制培养基时，一般先配制母液，其目的在于__使用方便__和__用量准确_。

21分生区域内无维管束，病毒只能通过___胞间连丝__传递。

22在无毒苗的组织培养中，外植体的大小与其成活率成__正比__，而与脱毒效果成_反比_。

二、单项选择题

1、( C )可作为植物外植体的表面消毒剂是。

A. 漂白粉和水

B. 次氯酸钠溶液和聚乙二醇

C. 氯化汞和新洁尔灭

D.酒精和氯化钠

2、( B）大多数植物组织培养最适温度一般为℃。

A.37±1℃

B.26±2℃

C.16±2℃

D.4±2℃

3、( A )在适宜的培养条件下，还可使愈伤组织长期传代生存下去，这种培养称为。

A. 继代培养

B. 再分化培养

C.胚状体培养

D. 驯化

4、( B )大多数植物组织培养培养基最适pH为。

A.5.0-7.0

B. 5.0-6.0

C. 3.0-4.0

D. 7.0-8.0

5、( A ）外植体褐变的原因是。

A.外植体中的多酚氧化酶被激活，使细胞的代谢发生变化。

B. 外植体中的琥珀酸脱氢酶被激活，使细胞的代谢发生变化。

C. 外植体中的磷酸化酶被激活，使细胞的代谢发生变化。

D. 外植体中的三磷酸腺苷酶被激活，使细胞的代谢发生变化。

6．植物组培初代接种易污染的可能原因＿＿。

A材料过嫩B材料过老C接种材料过大 D每瓶接种数量太少

7.影响培养基凝固程度因素有_________。

A琼脂的质量好坏；B 高压灭菌的时间；C 高压灭菌的温度；D 培养基的PH

8．愈伤组织不分化、生长过旺、疏松，其原因有＿＿

A糖的浓度过高 B培养基的渗透压过低C生长素和素过高 D生长素和素过低

9．有一种植物经初代培养得到４株无菌苗，以后按每３６天继代增殖一次，每次增殖倍数为３倍，一年后繁殖苗有＿A 3×410株

B 4 × 312株

C ４× 310株 D３× 412株

10. 下列不属于生长素类的植物激素是_________。

A BA；

B NAA；

C ZT；

D 2.4－D6

11. 植物组织培养可用于：_____________。

A 快速繁殖；

B 脱除病毒；

C 提高品质；

D 育种；

E 减少品种变异

12、诱导试管苗分化丛芽，培养基的调整应_____________。

A加大生长素的浓度B加大素的浓度 C加活性炭 D

13. 下列不属于MS中微量元素的盐是_________。

A NH4NO3；

B KNO3；

C ZnSO4.7H2O；

D MgSO4.7H2O

14. 对生根培养不起作用的激素是：__A__。

A GA；

B IAA；

C NAA；

D IBA

15、( D )在下列选项中，不需要采用植物组织培养技术的是 d 。

A、利用基因工程培育抗棉铃虫的棉花植株

B、利用细胞工程技术培养“番茄一马铃薯”杂种植株

C、利用花药离体培养得到单倍体植株

D、利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，得到染色体数目加倍的植株

16、( C ）植物组织培养形成的愈伤组织进行培养，又可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为。

A、脱分化

B、去分化

C、再分化

D、脱分化或去分化

17、( B ）下列哪种不是原生质体分离所用的酶___B____。

A、纤维素酶

B、淀粉酶

C、果胶酶

D、半纤维素酶

18、( A )在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程__A______。

A、营养细胞发育途径

B、生殖细胞发育途径

C、胚状体发育途径

D、花粉均等途径

19、( D )下列哪种在MS培养基中不起促进生长作用___D______。

A、氨基酸

B、肌醇

C、维生素

D、琼脂

20、( B )下列技术培育出的新个体中，遗传物质只来源于一个亲本的是。

①细胞组织培养②细胞融合③扦插④诱导产生多倍体⑤杂交育种⑥转基因工程

A、①④

B、①③

C、②④

D、⑤⑥

21、( a )下列那种不是无性繁殖的器官_________。

A、种子

B、枝条

C、块茎

D、块根

22、( b ) 植物离体保存的主要步骤是。

①离体培养物的保存②离体培养与祛除病原物③种质离体收集④遗传稳定性鉴定

A、①②③④

B、③②①④

C、②④①③

D、①②④③

23、 ( c ) 原生质体纯化步骤大致有如下几步。

①将收集到的滤液离心，转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准，一般以500r／min离心15min。用吸管谨

慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外，其他成分和酶液相同)，再次离心，去上清液，如此重复三次。

③将原生质体混合液经筛孔大小为40～100um的滤网过滤，以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质，收集滤液。

④用培养基清洗一次，最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104～106／ml。

A、①②③④

B、③②①④

C、③①②④

D、②③①④

24、( c )下列有关细胞全能性的含义，正确的是。

A、每个生物体内的所有细胞都具有相同的功能

B、生物体内的任何一个细胞可以完成该个体的全部功能

C、生物体的每一个活细胞都具有发育成完整个体的潜能

D、生物体的每个细胞都经过产生、、分化、生长、衰老、死亡的全过程

25、(d )下列不属于活性炭在组织培养中的作用是_________。

A、吸附有毒物质

B、减少褐变，防止玻璃化

C、创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长

D、增加培养基中的养分三、判断题

1、（√）胚状体的维管组织与母体结构和外植体的维管组织一般没有联系。

2、（×）培养基当中生长素与细胞素的比例高时，仅形成愈伤组织。

3、（×）对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术称为植物组织培养技术。

4、（√）植物组织与细胞培养方法生产出药品，农药，香料，色素及食品添加剂。

5、（×）超低温保存是指在-100℃温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜的条件下可迅速繁殖，生出新的植株，并保持原来的遗传特性。

6、（×）FAD法可显示细胞内脱氢酶的活性，脱氢酶使FAD还原生成一种红色的物质，作为检验活细胞的方法。

7、（×）蔗糖可作为渗透性冰冻保护剂。

8、（×）一方亲本的细胞核和细胞质分另一方亲本的少量核物质和全部细胞质融合

9、（√）有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，把这种植物称为病毒敏感植物或指示植物。

10（√）花药和花粉培养可获得单倍体植株。

叫细胞质杂交。

四、名词解释

1、脱分化有高度分化能力的植物组织或器官，产生愈伤组织的过程。

2、愈伤组织植物各器官的外植体在离体的条件下，经细胞脱分化（等一系列过程改变了它们原有的特性）而形成的一种能迅速增殖的不特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。

3、人工种子是指将植物离体培养产生的体细胞胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中，在适宜的条件下发芽出苗的颗粒体。

4、胚状体在离体或活体条件下，通过体细胞经原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷胚期和子叶期等阶段形成的胚叫体细胞胚状体。

5、植物快速繁殖利用离体培养技术，将来自优良植株的器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法

6、看护培养把单个细胞置于一块活跃生长的愈伤组织（也称看护愈伤组织，nursecalli）上培养，在愈伤组织和培养的细胞之间用一片滤纸相隔。这培养的单细胞长出微小的细胞团之后，再移至琼脂培养基上。

7、植物种质保存利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中所含有的遗传物质保持遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。

8、连续培养

是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。连续培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积的用过的培养基，培养液中的营养物质得到不断补充。

五、简答题

（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA 母液浓度0.2mg/ml。要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）

BA=0.8*1.5/1=1.2ml

NAA=0.8*2.5/0.5=4ml

IBA=0.8*1/0.2=4ml

蔗糖=800*2.5%=20g

琼脂粉=800*0.7%=5.6g

Ms绿色书23页表

（二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？如何防止外植体的真菌污染？

1. （第四章21页）（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。

（2）适当降低培养基中的细胞素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。

（3）增加自然光照。因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。

（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜

（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。

2.（第三章11页）

在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种前，应开机15min以达到空气的充分过滤灭菌。而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等。

（三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？

选材：较幼嫩的材料，器官的生理状态和发肓年龄，外植体的大小为0.5－1.0cm(第三章3页)

消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。（第三章5页）

接种：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子

②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。（第四章4页）

六、论述题

为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无特定病毒的植株？

1）．感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少。

2）．1.了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置2.母体植株的选择和预处理3.茎尖的剥离4.脱毒效果检测3）．取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀奖，将其涂抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。5分钟后用清水清洗叶面。将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。

请阐述马铃薯脱毒和快繁的程序。为什么试管苗在经过热处理和茎尖培养等方法脱毒后，还需要进行病毒的鉴定?

选择优良母株幼苗，茎尖的２～３cm小段，冲洗1h左右

表面消毒，（表面消毒剂、无菌水），在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，注射器针头或解剖针，切取带有1～2个叶原基的生长点，接种于培养基中培养。

病毒在植物体内分布是不均一的，热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖缓慢（停止），而失去侵染能力，所以还需要病毒鉴定。下载本文