【实验目的】
掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法，掌握分光光度计的正确使用
【基本原理】
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖 基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
【实验器材及试剂】
蒽酮，硫酸，纯净水，冰块
试管10支，玻棒1根，吸耳球，容量瓶（125mL）2个，擦镜纸，标签纸，油性笔，手套
可调试移液器或移液管 可见分光光度计(723型) 电子分析天平
水浴锅(100度)
80%H2SO4: 600mL 98% H2SO4加到130mL纯净水中，并不断搅拌。
蒽酮试剂:取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80% H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
待测葡萄糖溶液：10ml标准葡萄糖溶液稀释到40ml蒸馏水中。
【操作】
1. 标曲及样品检测
取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度(mg/ml )为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖--标准曲线的制作及样品检测
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 待测葡萄糖溶液 | |
| 标准葡萄糖溶液/mL | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 1 |
| 蒸馏水/mL | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0 |
| 置冰浴中5min | |||||||
| 蒽酮试剂 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| 沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min | |||||||
| A620 | |||||||
C×V
w = ----×100%
m
式中w:糖的质量分数(%)
C:从标准曲线中查出的糖质量分数(mg/ml)
V:样品稀释后的体积(ml)
m:样品的质量(ml)
【思考题】
1. 此方法中硫酸的作用是什么？为什么稀释浓硫酸时必须将浓硫酸加到水中？
2. 加入蒽酮后每个管颜色是否一样，为什么？下载本文
