1. 方法依据
本方法依据标准GB 47.11-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验》。
2.方法原理
根据β型溶血性链球菌的菌落特性，在特定的选择性琼脂平板上有特殊的菌落形态，经过增菌、分离、生化试验报告样品中检出或未检出β型溶血性链球菌。
3.主要仪器和试剂
3.1 仪器。
3.1.1显微镜
3.1.2高压灭菌器。
3.1.3微量移液器。
3.1.4恒温培养箱。
3.1.5菌落计数器。
3.1.6电子天平。
3.1.7 均质器。
3.1.8 振荡器。
3.2试剂。
3.2.1 改良胰蛋白胨大豆肉汤
3.2.2 哥伦比亚CAN血琼脂
3.2.3 哥伦比亚血琼脂
3.2.4 革兰氏染色液
3.2.5 胰蛋白胨大豆肉汤
3.2.6 3%过氧化氢溶液
3.2.7 生化鉴定试剂盒
4.实验步骤
4.1 样品处理及增菌
按无菌操作称取检样25 g （mL），加入盛有225 mL mTSB 的均质袋中，用拍击式均质器均质1 min～2 min。若样品为液态，振荡均匀即可。36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.2 分离
将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。
溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2 mm～3 mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。
4.3 鉴定
4.3.1 分纯培养
挑取5个（如小于5个则全选） 可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB 增菌液， 36 ℃±1 ℃，培养18 h～24 h。
4.3.2 革兰氏染色镜检
挑取可疑菌落染色镜检。β 型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
4.3.3 触酶试验
挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β 型溶血性链球菌触酶为阴性。
4.3.5 其他检验
使用生化鉴定试剂盒对可疑菌落进行鉴定。
5.计数方法
综合试验结果，报告每25 g（mL）样品中检出或未检出β型溶血性链球菌。
6.结果与讨论
6.1本实验室于2016年8月，对样品分析编号为B160805-07的黄酒中β型溶血性链球菌参照本法测定，测定结果如下：
| mTSB 36 ℃ 2016.08.05 日 15:25 ：起 2016.08.06 日 15:30 ：止 | ||||
| 样品 | 阳性对照 | 阴性对照 | ||
| 哥伦比亚CNA血琼脂平板 ℃ 厌氧 日 ：起 日 ：止 | 无菌落生长 | 灰白色半透明菌落 有β型溶血 | 无菌落生长 | |
| 哥伦比亚血琼脂平板 ℃ 日 ：起 日 ：止 | / | / | / | |
| 革兰氏染色镜检 | / | / | / | |
| 触酶试验 | / | / | / | |
| 生化试验 | 丙酮酸钠 | / | / | / |
| 七叶灵柠檬酸铁 | / | / | / | |
| L-精氨酸 | / | / | / | |
| D-核糖 | / | / | / | |
| L-阿拉伯糖 | / | / | / | |
| D-甘露醇 | / | / | / | |
| D-山梨醇 | / | / | / | |
| D-乳糖（牛源） | / | / | / | |
| D-海藻糖 | / | / | / | |
| 菊糖（菊根粉） | / | / | / | |
| D-棉子糖 | / | / | / | |
| 淀粉 | / | / | / | |
| 糖原 | / | / | / | |
| 结果 | 25mL样品中未检出 | |||
7.适用范围
本法规定了食品微生物指标β型溶血性链球菌检验。
8.小结
该方法适合本实验室情况，可用于食品微生物指标β型溶血性链球菌检验。下载本文
