专业班次 11农学一班 组别201130010110
题目 糖酵解中间产物的测定 姓 名 梁志雄 日期
【实验原理】
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4—二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4—二硝基苯肼—丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比
【实验材料和试剂】
实验仪器：恒温水浴锅、离心机、电子天平
实验用品：试管、移液管、玻璃棒
实验材料与试剂：酵母、10%三氯乙酸、5%葡萄糖、0.75mol/L NaOH、0.002mol/L碘乙酸、2，4-二硝基苯肼溶液、0.56mol/L硫酸肼
【实验步骤】
1、发酵过程观察 取干燥试管3支，编号1~3，分别加入0.2g酵母，再按下表所示加入试剂
表一
| 管号 | 1 | 2 | 3 |
| 10%三氯乙酸（ml） | 1 | 0 | 0 |
| 0.002mol/L碘乙酸（ml） | 0.5 | 0.5 | 0 |
| 0.56mol/L硫酸肼（ml） | 0.5 | 0.5 | 0 |
| 5%葡萄糖（ml） | 5 | 5 | 5 |
| 37℃保温45min，观察气泡多少，并记录 | 没有气泡，有白浆状的物质沉淀在底部，上部位乳白色溶液，少量气泡 | 底部沉底有少量白浆状物质，上部有较多乳白色泡沫，有较多气泡 | 底部几乎没有白浆状物质，试管上部有许多乳白色泡沫，有较多气泡 |
2、终止发酵和补加试剂 摄氏度保温45min后，按下表所示添加试剂
表二
| 管号 | 1 | 2 | 3 |
| 10%三氯乙酸（ml） | 0 | 1 | 1 |
| 0.002mol/L碘乙酸（ml） | 0 | 0 | 0.5 |
| 0.56mol/L硫酸肼（ml） | 0 | 0 | 0.5 |
3、发酵液过滤 上述3支试管分别过滤，取滤液用于显色鉴定
4、显色鉴定 取3支试管，按下表所列顺序加入试剂，观察各管颜色的深浅，记录
表二
| 管号 | 1 | 2 | 3 |
| 过滤液（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 0.75mol/L NaOH（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 室温放置5min | |||
| 2，4-二硝基苯肼（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 0.75mol/L NaOH（ml） | 3.5 | 3.5 | 3.5 |
| 观察颜色深浅，并记录 | 浅灰色 | 茶红色 | 灰色 |
实验记录与上述表格中
【实验结论】
1、在步骤1中，三氯乙酸是一种蛋白酶的变性剂，可以是酵母中的所有的酶失活，使糖酵解反应无法或只可很小程度上进行。在表一的1号试管中，由于加入了三氯乙酸，使酵母中的酶失活，不能分解葡萄糖，所以不能产生气泡；至于2号试管，由于加入了碘乙酸和硫酸肼，使糖酵解反应过程中的3-磷酸甘油醛累积，但是它门不能使反应完全停留在生成3-磷酸甘油醛这个阶段，碘乙酸和硫酸肼只是起到了延缓的作用，所以还是有部分葡萄糖被酵母菌分解生成CO2和H2O，3号试管中做为空白对照，葡萄糖被酵母菌分解，产生大量CO2和H2O
2、步骤2中，在表二的2号和3号试管中分别加入三氯乙酸是让两试管中的葡萄糖分解反应终止，加入试剂后立刻用玻璃棒搅拌是因为酶的作用很迅速；
3、步骤4的表四中，两次加入氢氧化钠主要都是为了使反应环境为碱性，使目的反应可以发生
