组织匀浆的制备方法\n发布时间：2013-01-27 浏览次数：38 返回列表\n\n1、取组织块（0.2g~1g）最少可到2～5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称 重，放入5或10ml 的小烧杯内 2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01 mol/L 蔗糖0.8％的氯化钠溶液）或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是 组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽 快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中） 。\n\n3、匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。 手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中 的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手 将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟） ，充分研碎，使组织匀浆化。\n\n机器匀浆：用组织研磨机（OMNIBead Ruptor 24 多样品研磨珠均质仪） 6m/s 研磨制成10％组 织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备(Omni Prep 多样品均质仪 )匀浆时间20秒/次，间隙10秒， 连续3-5次。 超声粉碎： 用超声波细胞破碎仪(OMNI Sonic Ruptor400W)进行破碎， 可用以振幅12.7mm 超声 处理30秒使细胞破碎.\n\n反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量 的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右） ，但有部分酶活力会 受影响。 取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可） ，显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长 匀浆时间或增加冻融次数。\n\n4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min 左右离心10～15分钟，若检测 ATP 酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定。\n\n\r\n
本实验方案采用 Omni 的 Bead Ruptor 24 多样品研磨珠均质仪和 Prep 多样品均质仪 （由北京平 利洋公司提供） 。\n\n\r\n下载本文
