视频1 视频21 视频41 视频61 视频文章1 视频文章21 视频文章41 视频文章61 推荐1 推荐3 推荐5 推荐7 推荐9 推荐11 推荐13 推荐15 推荐17 推荐19 推荐21 推荐23 推荐25 推荐27 推荐29 推荐31 推荐33 推荐35 推荐37 推荐39 推荐41 推荐43 推荐45 推荐47 推荐49 关键词1 关键词101 关键词201 关键词301 关键词401 关键词501 关键词601 关键词701 关键词801 关键词901 关键词1001 关键词1101 关键词1201 关键词1301 关键词1401 关键词1501 关键词1601 关键词1701 关键词1801 关键词1901 视频扩展1 视频扩展6 视频扩展11 视频扩展16 文章1 文章201 文章401 文章601 文章801 文章1001 资讯1 资讯501 资讯1001 资讯1501 标签1 标签501 标签1001 关键词1 关键词501 关键词1001 关键词1501 专题2001
Bio-Rad Western Blot半干法转膜的十大注意事项
2025-10-02 04:41:58 责编:小OO
文档
Bio-Rad Western Blot半干法转膜的十大注意事项

Do not immerse the unit in liquid. Use special care when cleaning the anode plate to avoid scratching or marring the platinum. Do not use abrasives or strong detergents. The cathode plate (stainless steel) can be cleaned with a mild abrasive to remove salt that may deposit during normal operation. The entire unit can also be periodically disassembled and cleaned with water to remove salt deposits.

推荐清洗方法:转膜结束后,立即用双蒸水将转膜仪冲洗几次,并晾干。

Electrophoretic transfer of proteins and nucleic acids is dependent on many factors. Observe the following guidelines to avoid mishaps that may result in serious damage to the instrument or injury to the operator.

1. Do not reverse polarity on this instrument. This will result in corrosion and rusting of the stainless steel cathode. If this should occur, the stainless steel should be cleaned with a mild abrasive cleaner to remove the rust. 

2. Do not exeed 25 V with this instrument. This could damage the electrodes.

3. Do not adjust the pH of transfer buffers unless specifically indicated. Following instructions carefully. Adjustment of pH of transfer buffers, when not indicated, will result in increased buffer conductivity. This is manifested by a higher than expected initial current output as shown by the power supply's current meter. Monitor buffer resistance with the Model 200/2.0 power supply prior to each run to insure proper buffer conductivity.

4. Lengthy tranfer times are not recommended. Do not leave this instrument unattached. Joule heat can be generated rapidly during semi-dry blotting. Transferring longer than 2 hours can damage the unit.

5. Power supply requirements. The Trans-Blot SD cell should only be used with the microprocessor-controlled Model 200/2.0 power supply or the Model 1000/500 power supply.

6. Do not operate this instrument in ambient temperatures exceeding 50 ℃.

7. Buffer preparation is extremely important. Do not adjust transfer buffer pH by addition of acid or base unless specifically indicated in the instructions. Improperly prepared buffer will cause excess heat generation and safety hazards. Use only high quality, reagent grade methanol. Contaminated methanol can result in increased transfer buffer conductivity, as well as poor transfer of macromolecules.

8. Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates the removal of electrophoresis buffer salts and detergents. If the salts are not removed, they will increase the conductivity of the transfer buffer and the amount of heat generated during the transfer. Also, low percentage gels (<12% acrylamide) will shrink in methanol-containing buffers. Equilibration allows the gel to adjust to its final size prior to electrophoretic transfer. The length of time required for equilibration is dependent on the gel thickness. For example, 15 minutes for a 0.75 mm SDS-PAGE gel.

Low molecular weight macromolecules ( 10,000 daltons) may diffuse out of gels more readily. One can allow adequate gel pre-equilibration by changing the pre-equilibration buffer several times during a relatively short pre-equilibration period. This will help to limit diffusion of low molecular weight macromolecules while providing efficient salt reduction.

9. Cut the membrane to the dimensions of the gel. Wet the membrane by slowly sliding it at a 45° angle into transfer buffer and allowing it to soak for 15–30 minutes. Complete wetting of the membrane is important to insure proper binding. Abrupt wetting can lead to entrapment of air bubbles in the matrix. These air bubbles can block transfer of molecules. To avoid membrane contamination, always use forceps or wear gloves when handling membranes.

10. Cut filter paper to the dimensions of the gel. Two pieces of extra thick filter paper (or four pieces of thick or six pieces of thin filter paper) per gel are needed for each gel/membrane sandwich. Completely saturate the filter paper by soaking in transfer buffer.下载本文

显示全文
专题