1供试材料来源:本实验材料取自盆栽的丰花月季,剪取腋芽尚未萌发的枝条,去除茎段两端各2毫米，选芽以茎段中芽为最好。

2技术路线:

外植体选取——初代培养——增值培养——生根培养——训化

3方法步骤:

  （1）外植体的剪取和消毒程序的筛选: 取无菌苗叶片切成0.5cm×0.5cm的小块，叶柄，茎段切成小段。外植体很小时，有利于培养脱毒的植株(对月季的杉树坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖，外植体的长度在9.0-10.0mm，直径在3.0-3.5mm范围时(茎的增殖和发育是最好的）.消毒:接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min;75%或70%乙醇表面消毒15s。用无菌水冲洗3次。2%NaClO灭菌5—10min。然后用无菌水冲洗3次。

  （2）初代培养基的筛选:诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞素6一苄氨基嘌呤(6-BA)和生长素萘乙酸(NAA)。NAA增加至0.1mg,L时， 6一BA浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响 。最适的侧芽诱导培养基为 MS + 6一B A 0.5,3.0 mg,L + NAA 0.0l,1(0mg,L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用 。

  （3）增殖培养基的筛选:诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加6一BA、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。KT，IAA等激素作用效果较差，协同作用不明显。低浓度的6 一BA有利于不定芽的增殖，浓度过高则抑制不定芽增殖，适量 NAA有利于芽和 叶生长，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。在 NAA浓度相同BA浓度不同的培养基中，随BA浓度的升高，芽苗的增殖系数也相应提高。在BA浓度相同而NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高，小芽生长速度加快

  (4).生根培养基的筛选:无菌芽苗在继代培养基中只诱导地上部分生长。待培养一段时间后，转入生根培养基中，诱导生根。 采用1,4 MS培养基，不加生长素即可以促进生根 。在无菌苗的生根诱导过程 中，生长素的种类和浓度起决定性作用。分浓度NAA、IBA、IAA对藤本月季进行生根培养，发现3种生长素的生根效果不同， 且浓度的影响较大。发现低浓度的生长素有利于根的形成，适当浓度的IBA、 NAA 对生根率有显著影响，浓度过高会抑制根的形成，NAA浓度为0.50mg,L时效果最佳。生根阶段加人活性炭(AC)后，有助于提高生根率和生根质量。

  (5).试管苗移栽实验

小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。所有试管苗移 栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻炼。锻炼时问与移栽成活率有关，练苗7d以上，成活率达到95,。影响移栽成活率的主要因素有3个:湿度、温度以及基质种类和带菌量。考虑到这3个因素，移栽时应保持90,以上湿度，18,25?的环境温度，基质用 0.2 ,的高锰酸钾或其他灭菌剂进行消毒灭菌。而基质的选择上，以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。移栽成活后喷极稀的营养液，使小苗得到营养补充。l0,15d即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大田移栽 。下载本文