一、硫酸-蒽酮法
1）仪器与试剂：分光光度计、水浴锅、20ml刻度试管、吸管、100ml容量瓶、10ml具塞试管、圆底烧瓶。蒽酮，无水葡萄糖，浓硫酸（比重1.84），无水乙醇，蒸馏水
2）操作方法
① 对照品溶液的制备：精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品200mg，置100ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀(2.0mg/ml)。精密吸取10ml，置另一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(0.2mg/ml)。
②多糖提取工艺：大枣→粉碎→称重→水浸提→上清液→乙醇沉淀→复溶→去除蛋白质→
纯多糖。
I 多糖提取工艺条件确定
确定浸提温度、时间、水料比和pH为影响因素，每个因素选三个水平，每组以10g原料计，作L9（34444）正交试验。如表1
表1 多糖提取条件
| 水平 温度（A）/℃ 时间（B）/h 加水倍数（C） pH（D） |
| 1 70 1 10 4 2 80 2 20 6 3 90 3 30 8 |
II 浸提级数的确定
在最佳的提取条件下对原料连续浸提3次。其结果为，第1次浸提后浸提率为3．5％，第2次浸提后浸提率为2.68％，第2次浸提后浸提率为1．16％。考虑到后期醇析工序的经
济性，采用2级浸提为宜。
III 醇析条件的选择
取一定体积的经提取、分离、抽滤后的上清液，分多组少量多次的加入不同量的乙醇于清液中，使乙醇终体积分数分别为75％、80％、85％。沉淀24h后离心，取其上清液测其多糖
的含量。结果表明，乙醇体积分数升高，醇析量增多，但乙醇终体积分数超过75％后，醇析量增大比例不甚明显，且上清液中多糖含量降低不大，考虑到经济因索，故选择醇析浓度为75％。
③蒽酮试液的制备：称取蒽酮0.2g，加100ml硫酸溶解即得。当日配置使用。
④标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于10ml具塞试管中，各用蒸馏水补至2.0ml，空白管吸取蒸馏水2.0ml，与供试品管作以下同步处理。各管分别精密加入蒽酮试液8ml，摇匀，浸于冰水浴中冷却，然后移至沸水浴中加热10分钟用水冷却，室温放置10分钟，取出照分光光度法，在620nm的波长处测定吸光度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3）计算：根据供试品吸收度及标准曲线回归方程计算得出供试品浓度，并计算得出含量。
多糖含量计算公式：C=（A-a）/b
A:回归曲线
a:回归系数（对照品横坐标数）
b:葡聚糖纵坐标读数
多糖含量=C /D×1000×100%
D：样品重量下载本文
