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小鼠LD50毒性试验

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BALB/c 小鼠LD50毒性试验

1.实验目的

衡量化合物的毒性，寻找安全剂量范围，为进一步体内活性评价提供数据支持。

2.实验原理

经口一次性给予或 24 h 内多次给予受试物后，在短时间内观察动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量 LD50来表示。

3.实验内容

(1) 探测化合物的 LD50剂量范围。

(2) 确定组数并计算各组剂量。

(3)正式实验：给不同组的小鼠灌胃不同剂量的药物，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。

(4)记录实验结果，并计算LD50。

4.实验材料

试剂：化合物，生理盐水。

材料：电子天平，注射器，灌胃针。

  实验动物：动物品系：BALB/c小鼠；性别：雌性；级别：SPF级；年龄：7周龄，实验周期内的动物年龄约为8-10周龄；体重，20±2g，实验前禁食12h。

5.实验方法与步骤

1．预实验：取小鼠20只，以3只为一组，分成5组。单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。选取一组剂量，进行化合物溶液灌胃给药。给药前禁食不禁水12小时，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围。

2．正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1:0.7或1:0.8）和生理盐水溶媒对照组，各组动物数为10只，分别用marker笔标记。动物的体重和性别随机分配，完成动物分组和剂量计算后灌胃给药最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。

6.观察与记录

首日给药后4小时内每小时密切观察小鼠活动状态和死亡情况，每天对各组小鼠进行称重，统计死亡数量。连续观察1-2周。

1.改良寇氏法计算[2]

根据改良寇氏法公式计算LD50、LD50的95%可信限.

LD50=lg-1{Xm-i(∑p-0.5)};SX50=i; LD50的95%可信限= log-1 (lgLD50±1.96×SX50)

（Xm：最大剂量的对数值；i：相邻两组剂量对数值之差；∑p：各剂量组死亡率之和；ｐ：各剂量组死亡率；q:各剂量组存活率；q=1-p；n：各组动物数；SX50：lgLD50的标准误差。

计算示例：

8.注意事项    

⒈  预试验要摸准药物引起0 和100%死亡率剂量的所在范围。

⒉  正式试验时各剂量按等比级数分组，应避免最大剂量组的死亡小于80%，最小剂量组死

亡率大于20%，否则改用其他方法计算。

⒊  室温：20 ℃为宜。

⒋  认真观察中毒症状情况。

参考文献：

1.，实验性缺氧和影响缺氧耐受性及戊巴比妥钠半数有效量(ED50)的测定。

2.张倩,,马晓玲,闫超群,何高明.加米霉素注射液对小鼠的急性毒性试验[J].现代畜牧科技,2017(03):4-5.

3.卫生部 GB15193.3-2003 号公告.急性毒性试验国标[S]. 2003

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