辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 13 No. 4 Apr . ，2011
抑郁症（Depression）是一种包括精神症状和
躯体症状的复杂的情感性精神障碍，其典型表现为：“三低”和“六无”。全世界抑郁症的发病率可达5%~12%，每年约有15%~20％的抑郁症患者会死于自杀。世界卫生组织、世界银行和哈佛大学的一项联合研究表明，2020年抑郁症将成为全球第二位威胁人类健康、增加经济负担的疾患。Schildkraut J.J.（1965）首先提出抑郁症发病的单胺递质学说
以来[1]
，
NE、5-HT 被认为是与抑郁症的发生关系最为密切的脑内单胺神经递质。在临床使用验方抗郁散能够有效地缓解和改善抑郁患者症状的基础上，为探索抗郁散对抑郁症的作用机制，利用国际上公认慢性不可预见性轻度应激模型（chronic unpredictable mild stress，CUMS），观察中枢神经递质5-HT 和NE 的含量变化，从分子水平上说明中药药效的微观机理。
1 材料与方法1.1 试验药物
抗郁散由香附、柴胡等药物组成（正在申请国
家专利受理），购于贵州省同济堂药业股份有限公司，经鉴定均为正品；中药给药剂量的计算方法是按成年人70kg 体重折算出大鼠（按体重200g 计算）每天的给药量为中剂量，小剂量、大剂量分别为中剂量的1/2倍、2倍。
盐酸氟西汀胶囊（奥麦伦）由上海中西医制药有限公司生产（批准文号：H19980114，剂量为20mg/粒）。西药给药剂量的计算方法：氟西汀胶囊每粒20mg，乃成人（按标准体重70kg 算）一天用量，大鼠体重按标准体重200g 算。根据“按人与动物等效剂
量的折算方法”[2]
。
1.2 实验动物
选用清洁级SD 大鼠60只，雄性，体重为（200±10）g，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供[重庆实验动物所质检，许可证号：SCXK（渝）2007-0005]。
1.3 实验试剂
标准品去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺
（5-HT）购买于百灵威化学有限公司。
抗郁散对CUMS大鼠中枢递质5-HT和NE的影响
赵博，李建国，冯秀萍，陈芳，吴大梅，张小容
（贵阳中医学院基础医学部，贵州 贵阳 550002）
摘 要：目的：观察抗郁散对慢性不可预见性轻度应激（CUMS）抑郁症模型大鼠行为学及脑内单胺神经递质
去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）的影响。方法：将60只清洁级SD 雄性大鼠，随机分为空白对照组、模型组、西药氟西汀组、抗郁散大、中、小剂量组，每组10只。其中50只大鼠采用 CUMS 制备抑郁模型；采用高效液相-电化学检测法（HPLC-ECD）检测脑内5-HT 和NE 含量的变化，进行统计分析比较。结果：与模型组比较，抗郁散中剂量组的大鼠体重明显增加（P <0.05），行为活动明显增多（P <0.05），对糖水的偏嗜明显增强（P <0.05），脑内单胺
神经递质NE 和5-HT 的含量显著提高（P <0.05）
。结论：抗郁散具有改善 CUMS 抑郁模型大鼠行为学的特征，明显提高 CUMS 抑郁模型大鼠脑内单胺神经递质5-HT 和NE 的含量，提示抗郁散通过提高大鼠脑内单胺神经递质5-HT 和NE 的含量或活性，从而达到治疗抑郁症的目的。
关键词：抑郁症；抗郁散；去甲肾上腺素；5-羟色胺
中图分类号：R283 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2011) 04- 0014- 04收稿日期：2010-10-21
基金项目：贵州省科学技术基金资助项目（黔科通2009—57-11号）作者简介：赵博（1960-），男，北京人，教授、主任医师，硕士生导师，学士，研究方向：中医药防治抑郁症相关研究。
Study on Effects of Neurotransmitters 5-HT & NE in CUMS Rat with Depressant Kangyusan
ZHAO Bo，LI Jian-guo，FENG Xiu-ping，CHEN Fang，WU Da-mei，ZHANG Xiao-rong
（Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，Guizhou，China）
Abstract：
Objective ：The present study was designed to observe the effects of behavior and brain monoamine neurotransmitters norepinephrine and 5-hydroxytryptamine in chronic unpredictable mild
stress depression model rats and to explore its mechanism with antidepressant Kangyusan. Methods ：
60 weight（200±10）
grams of clean grade SD male rats were randomly assigned into control group，model group，fluoxetine group，antidepressants（scattered large，medium and small dose group），then they were carried by sucrose consumption test，open field test and evaluated the monoamine neurotransmitters
norepinephrine and 5-hydroxytryptamine. Results ：
Experimental results showed that norepinephrine and 5-hydroxytryptamine of antidepressants group were increased significantly respectively（P <0.05）
. Conclusions ：Our results suggest that antidepressants Kangyusanhas some beneficial effects on brain neurottansmitters（NE，5-HT）in CUMS model rat，thus this drug may be useful for treatment of depression.
Key words：depression；kangyusan；norepinephrine；5-Hydroxytryptamine
1.4实验仪器
1.4.1 造模设备
水迷宫游泳缸，烘热箱，电刺激装置，固定鼠笼，止血钳。
1.4.2 高效液色谱仪-电化学检测器（HPLC-ECD-20AT）
高效液相色谱仪为日本岛津6A；LC-20AT电化学检测器；色谱柱为迪玛C18色谱柱，4.6mm×250mm，粒度5μm。
1.5试验方法
1.5.1 试验分组与模型制备
将60只大鼠随机分为空白对照组和抑郁模型组，空白对照组10只，抑郁模型组50只。按照文献方法进行CUMS抑郁症模型复制，并且模型大鼠均单笼孤养[3]。CUMS模型的制备：将8种刺激[①禁食（24h）；②禁水（24h）；③昼夜颠倒（24h）；④冷水游泳（4℃，5min）；⑤热烘（45℃，5min）；⑥夹尾（3min）；⑦电击足底；⑧行为]随机安排到21天内，每天1种，且相邻两天不得重复一种刺激，使大鼠不能预料刺激的发生。造模成功后，将抑郁模型组随机分为模型生理盐水组、西药氟西汀组、抗郁散大、中、小剂量组，每组10只，以分别给药。
1.5.2 敞箱试验（open field test）
本实验所用敞箱为自制长方体，高40cm，底面边长为80cm，周壁为黑色，底面分为面积相等25个小方块，将大鼠置于敞箱中间的方块，以动物穿越底面小方块数为水平活动（crossing）得分，以直立次数（两前爪离地）为垂直活动（rearing）得分。每只动物仅进行1次测定，每次测定时间为3min。评定大鼠在3min内的活动情况。评定指标：方格间穿行次数，竖起修饰次数。
1.5.3 糖水消耗试验
测定大鼠24h饮用1%蔗糖水的量。在禁水禁食24h后。用带有刻度的饮水瓶给予每只大鼠1%的蔗糖水饮用，测定并计算24h的饮用量。
1.5.4 脑组织样本制备
将大鼠断头，快速在冰盘上分离出脑组织，放入匀浆器中加0.1mol/L高氯酸（内含0.1%半胱氨酸）1mL，冰浴中磨成匀浆液，4℃高速离心20min（离心速率为18000r/min），取上清液放-70℃超低温冰箱保存待测[20]。
1.5.5 测定方法
用高效液相-电化学检测法（HPLC-ECD）检测脑内单胺神经递质去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）含量；缓冲液：3mmol/L庚烷磺酸钠，100mmol/L醋酸钠，85mmol/L柠檬酸，0.2mmol/L EDTA，缓冲液调至pH为4.0；色谱条件：迪玛C18色谱柱，4.6mm×250mm 粒度5μm；流动相：缓冲液/甲醇（体积比）：90/10（v/v）；检测器电极：玻璃碳电极；检测电压：0.75V，高压泵流速1mL/min，柱温20℃；
1.5.6 实验数据处理
采用N2005色谱数据工作站做出纪录，利用SPSS 12.0统计软件进行分析处理，组间比较采用单因素方差分析，统计结果用均数±标准差（x—±s）表示。
2 实验结果
造模过程中，各组均无异常死亡。给药过程中，西药组死亡1只（在给药的第9天），模型组死亡1只（在给生理盐水的第15天）。脑组织匀浆过程中，因匀浆器破裂，导致匀浆液检测样品损坏3份，正常组1份，小剂量组2份。
2.1一般情况
见表1。
表1 不同时间段大鼠一般情况的变化
外部特征 正 常 组 模 型 组 1~7天8~31天32~56天1~7天8~31天32~56天
皮肤毛发光滑润顺光滑润顺光滑润顺光滑润顺枯乱不泽润泽顺整精神状态机灵活跃机灵活跃机灵活跃机灵活跃萎靡较活跃
饮食状态正常正常正常正常减少较正常
睡眠状态良好良好良好良好倦卧多睡较好
情绪反应稳定稳定稳定稳定胆小易惊较稳定
大便状态软硬适中软硬适中软硬适中软硬适中稀溏较稀溏2.2体重变化
见表2。
表2 各组大鼠的体重变化（g，x—±s）
组别 n造模前 造模后 给药后
正常组 9 197.0±4.44270.8±5.61321.1±5.58
模型组 9198.3±5.52235.6±4.61▲278.6±3.32▲
西药组 9198.0±3.234.8±5.04▲292.6±5.08▲●中药大剂量组10197.6±5.48234.8±4.34▲ 295.4±4.38▲●中药中剂量组10197.8±5.04237.4±4.50▲302.4±7.71▲●中药小剂量组 8 197.5±4.70 236.8±4.83▲280.3±3.50▲注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
2.3敞箱实验
见表3~4。
表3 各组大鼠的水平活动（次，x—±s）
组别n造模前造模后给药后
正常组 937.5±1.7638.3±2.3838.0±1.99
模型组 938.0±2.9613.6±3.50▲13.7±2.18▲
西药组 937.7±1.7312.1±3.10▲36.9±1.97●
中药大剂量组1037.3±1.9511.0±2.79▲36.5±1.72●
中药中剂量组1037.8±1.8711.5±2.68▲35.9±4.20●
中药小剂量组 838.6±1.9612.8±2.48▲24.1±1.69▲●注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
表4 各组大鼠的垂直活动（次，x—±s）
组别n造模前造模后给药后
正常组 912.8±1.8612.5±1.7912.0±1.82
模型组 913.0±2.29 5.0±1.23▲ 5.9±1.05▲
西药组 912.9±1.76 5.2±1.39▲10.9±2.26●
中药大剂量组1012.2±1.23 4.6±1.27▲10.6±1.35●
中药中剂量组1012.5±2.01 4.3±1.70▲11.1±2.08●
中药小剂量组 812.7±1.06 5.4±1.10▲ 7.4±1.51▲●注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
2.4糖水消耗试验
见表5。
表5 各组大鼠的糖水饮用量（mL，x—±s）
组别n造模前造模后给药后
正常组 930.9±2.3629.6±2.5631.2±2.56
模型组 929.6±2.6515.6±4.▲15.6±4.75▲
西药组 929.2±3.0315.0±3.69▲29.5±3.91●
中药大剂量组1030.8±2.3014.5±5.99▲29.5±3.69●
中药中剂量组1029.8±2.4415.0±5.77▲28.5±3.38●
中药小剂量组 830.6±2.7214.6±3.74▲23.9±3.87▲●注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
2.5脑内单胺神经递质
2.5.1 去甲肾上腺素（NE）含量
见表6。
辽宁中医药大学学报13卷
表6 各组大鼠NE的含量（μg/mL，x—±s）
组 别n NE
正常组 9 0.2320±0.0665●
模型组 90.0861±0.0282▲
西药组 90.2934±0.0944●中药大剂量组100.2120±0.0143
中药中剂量组100.3474±0.1917●
中药小剂量组 80.1147±0.0079▲
注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
2.5.2 5-羟色胺（5-HT）含量
见表7。
表7 各组大鼠5-HT的含量（μg/mL，x—±s）
组 别 n5-HT
正常组 9 0.8279±0.1581●
模型组 90.3938±0.0958▲
西药组 90.7227±0.1754●中药大剂量组100.3966±0.2251▲
中药中剂量组100.7986±0.1565●
中药小剂量组 80.5072±0.0937▲
注：▲表示与正常组比较，P<0.05；●表示与模型组比较，P<0.05。
4 讨 论
单胺类神经递质学说堪称抑郁症发病的经典学说，起源于上个世纪60年代，成熟在上个世纪90年代，该学说认为脑内单胺递质NE和5-HT缺乏或功能不足是导致抑郁症发病的直接原因。一直以来，国内外学者多围绕NE、5-HT、DA以及它们的代谢产物3-甲氧基4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、高香草酸（HAV）进行探讨。近年来，多数学者认为单胺类神经递质系统功能失去平衡是抑郁症发病的关键[4]。
NE作为一种中枢神经递质参与机体多种生理功能的调节，包括对心、血管活动、体温、情绪的调节，同时也与学习和记忆、睡眠和觉醒、焦虑和痛觉的感知等功能有关。1965年Schildkraut J. J.首先提NE在重要脑区的绝对或相对缺乏导致抑郁症的关键因素，中枢神经系统中NE含量下降，则发生抑郁状态，反之则发生躁狂状态。几乎同时，Bunny W.E.，Davis J.M.等许多学者通过研究NE的代谢产物3-甲氧基4-二羟基苯乙酸（DOPAC）和受体的变化来研究抑郁症患者脑内NE的改变，得出的结论为NE含量的下降和功能不足与抑郁症密切相关，推测由于NE系统慢性刺激所致的继发性耗竭或内源性的生成释放异常导致NE的缺乏。药理学的研究表明NE 再摄取抑制剂可以改善许多病人的抑郁症状，说明NE可能参与了抑郁症的形成过程[5]。
5-HT是一种重要的神经递质，它与睡眠、警觉、情绪、记忆、丘脑下部内分泌调节等机能有关，其变化反映了中枢活动状态。人体中的5-HT首先在血清中被发现，它由血小板破坏而释放出来。机体内5-HT有99%存在于外周，只有1%存在于中枢神经细胞内。而与抑郁症相关的正是中枢系统5-HT含量改变。血中色氨酸通过血脑屏障进入脑后，首先在色氨酸羟化酶作用下生成5-羟色氨酸，然后在5-羟色氨酸脱羧酶的作用下脱羧生成5-HT。
中枢5-HT 神经元沿脑干中线分布，并发出长轴支配从脊髓到皮层的整个神经系统。前脑5-HT 几乎全都来源于中脑背侧中缝核神经元，其末梢
密集区包括下丘脑、皮层、海马回、杏仁核、纹状体。Van Praagh.M.（1970）首先发现抑郁症患者脑脊液5-HIAA含量低下，Coppen A.（1972）提出5-HT功能异常与情绪低落、自杀行为等直接关联。Prange A.等根据NE和5-HT系统的综合研究认为：5-HT 系统低下为NE功能改变所导致的情感障碍提供了基础，在5-HT功能低下的基础上，NE低下便出现抑郁状态，而NE功能亢进则表现为躁狂状态[6]。大脑神经递质NE、5-HT等生物胺类物质在神经元之间或神经与效应细胞之间进行信息的传递，整合调节人体的整体协调功能活动，若神经递质缺乏或单胺类神经递质系统功能失去平衡便会导致抑郁症的发生。
抑郁症的动物模型研究是抗抑郁药物筛选、药物作用机理和病理生理学的重要方法之一。慢性不可预见性轻度应激模型（chronic unpredictable mild stress，CUMS）是 Willner 等在 Katz 发明的慢性可变应激（chronic variable stress，CVS）模型的基础上改进而成的。Willner 主要做了两方面的改动，一是使应激因子的强度明显降低，二是以快感缺乏的测量作为模型是否成功的关键。其理论依据与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源促进疾病发生、加速疾病发展的机理更接近。因其慢性不可预见性轻度应激导致抑郁动物脑内奖赏刺激阈值升高和位置偏爱下降，与人类抑郁症的核心症状（快感缺乏）非常相似。更重要的是此模型与人类抑郁症的发病机制极为相似，其慢性不可预测性的应激模拟了人类抑郁症的发病机理；采用的应激因子更贴近人类在现实生活当中经常遇到的应激性事件的强度。而且该模型具有模拟了重型抑郁障碍的症状表现，如运动能力及社会交往能力下降、探索行为能力下降等，而且模型复制持久而稳定的优点，是目前国内外文献中广泛使用的抑郁动物模型容易复制，也是作为抗抑郁药物的筛选和抑郁症病理生理机制研究的最佳模型[7]。
敞箱试验是比较经典的、用于反映动物探究行为及情绪反应的试验。是用来客观研究动物模型行为学较常用的一种实验方法，该试验的水平活动反映了动物的活动度，垂直活动反映了动物对新鲜环境的好奇程度。液体消耗实验中糖水消耗量、糖水偏爱百分比是作为衡量 CUMS 抑郁模型快感缺乏的有效客观指标。本实验选取糖水消耗量作为衡量 CUMS 抑郁模型快感缺乏的客观指标。
中国中西医结合学会精神病专业委员会（1987—1991年）制定并修订了躁郁症的中西医结合辨证分型标准，其分型标准为肝郁脾虚、肝郁气滞、心脾两虚、肝肾阴虚，尤其以肝郁脾虚为主，抗郁散就以此立方，因此全方由香附、柴胡等组成。本实验证明：抗郁散具有改善 CUMS 抑郁模型大鼠行为学的特征，明显提高 CUMS 抑郁模型大鼠脑内单胺神经递质NE和5-HT的含量，提示抗郁散通过提高大鼠脑内单胺神经递质NE和5-HT的含量或活性，从而达到治疗抑郁症的目的。◆
参考文献
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第13卷 第4期 2011 年 4 月
辽宁中医药大学学报
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Vol. 13 No. 4 Apr . ，2011
[ 2 ] 徐叔云，卞如廉，陈修.药理实验方法学[ M ] .3版.北京：人民
卫生出版社，2006：179-181.[ 3 ] Willner P，Towell A，Sampson D，et al. Reduction of glucrose
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on open field activity in the rat：implications for a model of depression[ J ] .Neurosci Biobehav Rev，1981，5 ( 2 )：247-251.
《推拿学》是中医针推专业的主干课程之一。
其临床实践以手法为主要的治病方式，决定了该课程为实践性很强的临床课程。熟练的推拿手法是推拿医生取得临床疗效的关键因素，是衡量针推专业本科生临床技能水平的重要评价内容[1]。从既往实习带教情况看，针推专业学生在推拿科的临床实习，存在着学习兴趣不足，以及学习时间较短与学习任务重之间的矛盾。因此我们在教研室带教经验的基础上，规范教学方法，采取教师讲解示范、学生临症实践和教学效果评价相结合的方法，旨在提高学生学习兴趣和推拿手法临诊实践能力。通过对前后52名轮转实习本科生的调查，结果显示总体上94%的同学对学习效果评价积极。
1 教学对象
全部对象来自上海中医药大学，于2009年12月—2010年9月在上海市中医医院推拿科实习的针推专业本科生，共计52名。其中男生16名，女生36
名。轮转学习为期1个月。
2 教学与调查方法
2.1 教学方法 教研室教师根据既往临床带教经
验和教学大纲要求，首先讨论制定推拿手法临证实
训计划，然后对新入科实习的学生布置重点学习内容，嘱学生复习手法要领，明确手法治疗对象。发放教学多媒体资料，包括PPT 和手法教学光盘，提高学生利用课余时间学习的兴趣。在此基础上学生跟师临床实践（学生询问病史、查体，书写病史，确定拟采取的治疗原则与方法，进行手法操作），并由教师进行进一步示范性治疗，提出具体指导意见。矫正性手法在教师示范讲解后再由学生体会操作。课后师生分析手法作用原理，交流手法体会。
教学过程遵循循序渐进的原则，授课内容以及多媒体资料突出临床重点实用性手法的训练。选择软组织刺激性手法，如一指禅推、法、按揉、弹拨、擦法、拿法等。运动关节类手法，如拔伸法、摇法、
针推专业推拿学临床带教建设调查报告与分析
纪清1，王桂茂1，徐旭1，姚斐2
（1.上海中医药大学附属上海市中医医院，上海 200071；2.上海中医药大学针推学院，上海 201203）
摘 要：中医针推专业学生的临床实习中，手法教学为其中关键一环。本教学研究在既往推拿手法临床实践带
教经验的基础上，规范了教学方法，强化对重点病种和相应适用性手法的训练，并通过调查问卷了解学生对课程的认识和评价课程教学效果，以期优化实践教学效果。
关键词：针推专业；手法教学；实习
中图分类号：G420 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2011) 04- 0017- 02收稿日期：2010-10-21
基金项目：上海中医药大学第十期校级课程建设项目（JX010102）作者简介：纪清（1963-），男，上海人，主任医师，硕士生导师，研究方向：针灸推拿临床与教学研究。
An Investigation and Analysis of Teaching Effect to Acupuncture-tuina Specialty Students in Clinic
JI Qing 1，
WANG Gui-mao 1，XU Xu 1，YAO Fei 2（1.Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200071，China；2. Acupuncture and Tuina College，
Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China）Abstract：
The clinical practice of acupuncture and tuina students practice a key element in teaching. In this study，based on the previous teaching method of manipulation in clinical practice，teaching methods was standardized，enhancing the applicability of key diseases and the corresponding methods of training，and students through a questionnaire about knowledge of curriculum and evaluation process of teaching effectiveness in order to optimize practice teaching.
Key words：acupuncture and tuina specialized；teaching of manipulation；practice下载本文
