MagBeads Tissues Gen DNA Extraction Kit
【目 录 号】TGDE-5005、TGDE-5030
【运输条件】2~25℃；
【保存条件】磁珠悬浮液 2~8℃，其它组分室温保存；
【试剂盒组成】
Kit Component
| 试剂盒组成 | TGDE-5005 （50T） | TGDE-5030 （300T） |
| TGDE-Buffer 1 裂解液 1 | 20 mL | 120 mL |
| TGDE-Buffer 2 裂解液 2 | 10 mL | 60 mL |
| TGDE Magnetic Beads 磁珠悬浮液 | 5 mL | 30 mL |
| ④ Wash Buffer 清洗液 | 35 mL | 210 mL |
| ⑤ Dealcohol Buffer 除醇液 | 20mL | 120mL |
| ⑥ Elute Buffer 洗脱液 | 5 mL | 30 mL |
1.磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，使用前请充分混匀；
2.使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现结晶，如有结晶请置于65℃水浴重新溶解；
3.在使用本试剂盒前，请用户自配80%乙醇；
4.如需去除RNA请自备RNase A溶液（100mg/mL, 分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0）；
5.本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。
【产品简介】
本产品适用于从各种动物组织以或者细胞样本中提取基因组DNA。试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和独特的缓冲液系统。特殊技术包埋的纳米磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力，而当条件改变时可以释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。
本试剂盒提取所得基因组DNA产物得量高、纯度好，适用于各种下游分子生物学实验，如：酶切、PCR、QPCR、文库构建、Southern 杂交、芯片检测和高通量测序等。本试剂盒可配合核自动化酸提取仪或工作站使用，实现高通量操作。
【试剂盒说明】
| 组织样本类型 | 样本量（mg） | 核酸得量（μg） | ||
| 动物 | 哺乳动物 | 脑 | 35 | 20-30 |
| 心脏 | 35 | 20-30 | ||
| 肝脏 | 35 | 30-50 | ||
| 脾脏 | 35 | 50-70 | ||
| 肾 | 35 | 30-50 | ||
| 肺 | 35 | 50-70 | ||
| 肌肉组织 | 55 | 5-15 | ||
| 毛发 | 2~50根 | 0.1-3 | ||
| 其它组织 | 鱼类 | 55 | 5-15 | |
| 虾类 | 55 | 5-15 | ||
| 贝类 | 55 | 30-60 | ||
仪器自动版
研钵（或组织研磨机、匀浆机）、英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、80%乙醇、异丙醇、液氮。
手动版
研钵（或组织研磨机、匀浆机）、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、80%乙醇、异丙醇、2.0mL离心管、离心管配套用磁力架、液氮。
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【仪器自动版操作步骤】
本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取。
1．准备96孔板
参照下表向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：
| 样本孔位 | 1、7 | 2、8 | 3、9 | 4、10 | 5、11 | 6、12 |
| 试剂 | 磁珠悬浮液80μL 清洗液600μL | 裂解液2 200μL 异丙醇 300μL | 80%乙醇 600μL | 80%乙醇 600μL | 除醇液 400μL | 洗脱液 100μL |
2．样本前处理
组织样本：
取适量组织样本，液氮研磨至粉末状。尽可能转移至2.0mL离心管中，加入400μL裂解液1，涡旋振荡1~3min，至组织粉末呈云雾状；
注：针对毛发样本，可剪除毛发根部，毛干部分剪成1~5mm长度。
细胞样本：
用离心管收集组织细胞（细胞个数：5*101~5*107），PBS清洗2次，向收集好的细胞中加入400μL裂解液1重悬细胞，涡旋振荡1~3min。
3．样本裂解
将离心管置于65℃水浴锅中温浴15min，每隔5min颠倒混匀一次。结束后将离心管12000rpm室温（勿低于15℃）离心5min，待用。
注：如需去除RNA，请额外加入5μL RNase A。
4．上机提取
将裂解完毕离心管中所有上清液转移至准备好的96孔板第2、8列孔位，然后将96孔板放入ETP-300型核酸提取仪中，插入磁棒套，打开仪器操作软件，调用“动物组织DNA提取实验方法”程序，单击“运行”执行程序。
5．核酸转移
程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的离心管或者PCR板中，做好标记，-20℃保存备用，此时可以弃去96孔板。
“动物组织DNA提取实验方法”程序各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定：
| 步骤编号 | 孔位 | 运行类型 | 振荡时间(秒) | 分离时间(秒) | 挥发时间(秒) | 振荡 幅度 | 振荡 强度 | 一组温度(℃) | 二组温度(℃) | 三组温度(℃) | 四组温度(℃) |
| 1 | 1 | 磁珠转移 | 2 | 2 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 2 | DNA结合 | 240 | 2 | 0 | 4 | 中 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 3 | 1 | 清洗1 | 180 | 2 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 4 | 2 | DNA结合 | 480 | 2 | 0 | 4 | 中 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 5 | 1 | 清洗1 | 180 | 2 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 6 | 3 | 80%乙醇 | 180 | 2 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 7 | 4 | 80%乙醇 | 120 | 2 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 8 | 5 | 除醇 | 0 | 2 | 0 | 3 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 9 | 6 | 洗脱 | 360 | 20 | 0 | 2 | 中 | 60 | 60 | 60 | 60 |
| 10 | 3 | 弃磁珠 | 10 | 0 | 0 | 5 | 强 | 0 | 0 | 0 | 0 |
【手动版操作步骤】
1.样本前处理、裂解
参考【仪器自动版操作步骤】步骤2、步骤3操作。
2.核酸结合
将裂解完毕离心管中所有上清液转移至新的离心管中，加入80μL磁珠悬浮液以及300μL异丙醇，颠倒混匀，涡旋振荡6min，静置2min。
3.磁性分离
将离心管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全；如果离心管内盖有磁珠，可保持离心管在磁力架上，整体上下颠倒2~3次至磁珠被完全吸附。保持离心管固定于磁力架上，用移液吸弃上清液，期间避免接触磁珠。
4.清洗
1)将离心管从磁力架上取下，加入600μL清洗液，高速涡旋振荡1min，重新置于磁力架上磁性分离（参考步骤4操作）。
2)使用600μL 80%乙醇，参考步骤5(1)操作2遍。
5.除醇除醇（如下方法任选其一）
方法1：将除尽上清液后的离心管置于磁力架上，一同放入45℃真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。
注：亦可置于通风橱通风或电风扇直吹约10min，具体时间以磁珠干透无乙醇味为准。
方法2：将除尽上清后的离心管保持在磁力架上，加入400μL除醇液，快速手摇润洗吸附的磁珠表面，之后快速弃去除醇液。
注：该步骤操作时间不宜过长，且不可吹散磁珠，否则影响核酸得量。
6.洗脱
取出离心管，加入100μL洗脱液，用移液吹散磁珠，65℃温浴10min，每隔3min涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。
7.核酸转移4
洗脱完毕后，将离心管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液将洗脱液转移至另一干净离心管中，做好标记，-20℃保存备用，此时可以弃去磁珠。
*本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。
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