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如何对单个基因的DNA甲基化水平进行检测?
2025-10-04 22:07:02 责编:小OO
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如何对单个基因的DNA甲基化水平进行检测?

众所周知,p-1030、p-1032和p-9005这3个试剂盒都是用来检测总体水平的5mC、5hmC和m6A的量,不能检测单个基因的。那么现在就来聊聊,如何检测单个基因的DNA甲基化水平,比如DNA 5mC甲基化水平、5hmC甲基化水平,以及RNA m6A甲基化水平。

一、如何定量检测某基因的DNA 5mC甲基化水平?

如果是检测总的,一个p-1030或者p-1034就可以搞定,简单快捷,结果还好看。但是针对特定基因的话,就不能用这么用了,参照以下:

1.BSP是甲基化检测的金标准,这里就不细说了。主要说说MSP—甲基化特异性PCR。MSP的实验过程简单来说就是提取样本中的DNA进行亚硫酸盐转换,最后将转换的DNA进行定量PCR,由此来确定特异基因甲基化修饰。Cat#p-1026 BisulFlash DNA Modification Kit 搭配 Cat#p-1028 Methylamp MS-qPCR Fast Kit

搭配描述:用户可用自己的方式提取DNA,再用p-1026进行亚硫酸盐转换,转换后甲基化的5-mC保持不变,没有甲基化C转换成U。之后用p-1028进行MS-qPCR,针对目的基因设计一对靶向甲基化区域的引物进行PCR即可。而且用我们的MS-qPCR可将时间缩短到70min(1h 10min)钟哟,普通的一般需要(2.5h)

转换流程和结果展示:

2.IP是个非常常用的技术手段,有些人以为IP只能下拉蛋白,是不是?IP抗体+磁珠,下拉下来的不就是蛋白嘛!但是,如果你现在需要的IP试剂盒是含有5mC的DNA对吧?Cat# p-1015:Methylamp Methylated DNA Capture (MeDIP) Kit Cat# p-1052:EpiQuik MeDIP Ultra Kit 搭配 Cat# p-1028:Methylamp MS-qPCR Fast Kit Cat# p-1029:  EpiQuik? Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述:用户可用自己的方式提取DNA,再用p-1015或者p-1052进行5mC甲基化DNA下拉富集,再用p-1028进行甲基化特异性PCR实验,进行特异基因甲基化的定量。也可以使用p-1029进行qPCR。

富集流程+结果展示:

二、如何定量检测某基因的 5hmC甲基化水平?

关于DNA羟甲基化的定量检测,检测总的话就是p-1032,基于ELISA的方法,可进行绝对的定量。而特异基因的5hmC检测参照的方式与5mC的一样,也是先IP下来所有的5hmC DNA,再进行定量检测。

Cat# p-1038:EpiQuik Hydroxymethylated DNA Immunoprecipitation (hMeDIP) Kit 搭配 Cat# p-1029:  EpiQuik Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述:客户可用自己的方式提取DNA,再用p-1038进行5hmC甲基化DNA下拉富集,再用p-1029,进行特异基因5hmC甲基化的定量。

富集流程+结果展示:

三、如何定量检测某基因的 RNA m6A甲基化水平?

很多小伙伴想用p-9005这个试剂盒来检测单个基因的m6A的量。但是,它也不能检测单个基因的RNA m6A的量。所以,至于如何进行单个基因的,先进行IP,再进行PCR实验,这里就多了一步反转录。Cat# p-9018:EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment (MeRIP) Kit Cat# 202-003:m6A 抗体 搭配 Cat# p-1029:  EpiQuik? Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述:用户可用自己的方式提取RNA,用p-9018进行m6A RNA富集,将富集后的m6A RNA进行发转录后,进行qPCR。也可以使用p-9018和202-003 m6A抗体,进行IP实验,适用实验类型多,物种广。

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文章来源:艾美捷科技下载本文

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