细菌的革兰氏染色
幻灯片2
一、实验目的
1. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
2. 学习并掌握革兰氏染色技术，进一步熟练光学显微镜油镜的使用技术。
幻灯片3
●二、基本原理
● 由于两类细菌细胞的成分和结构不同，导致染色结果不同。 G+细菌呈紫色, G-细菌呈红色。
● 当细菌用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。
● 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
幻灯片4
●二、基本原理
● 染色关键在于脱色剂的脱色作用。当用乙醇（或丙酮）处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。
● G+细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量较低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量较高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
幻灯片5
三、实验材料
1 菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌
2 革兰氏染液
3 其他物品 显微镜，载玻片，盖玻片，擦镜纸，接种针，滤纸、擦镜纸
幻灯片6
四、实验流程
涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫初染（1min）→水洗→碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s）→立即水洗→沙黄复染（1min）→水洗→滤纸吸干→镜检
幻灯片7
涂片固定
单染:结晶紫染液第一次染色1~2min
幻灯片8
脱色:95%乙醇溶液进行脱色洗脱
复染:红色的藩红染液第二次染色
幻灯片9
革兰氏染色镜检结果
幻灯片10
六、实验报告
1、 要求绘制菌体形态图，并标识其菌名和放大倍数。
2、要保证革兰氏染色结果准确可信，应该注意那些方面的问题？
3、不经过复染这一步，是否可以区分G+和G-?
幻灯片11
幻灯片12
幻灯片13下载本文
