准备：
1、R6834-01 :实验前向RNA Wash中加入无水乙醇48ml；
2、β巯基乙醇：向TRK Lysis Buffer 中以20ul/Ml 的浓度加入β巯基乙醇（该混合液室温可保存1周，故应根据所需配制，防止单次配制过多）
3、离心需在22℃～25℃进行；
4、冰上操作，应用RNase free的器皿，注意无菌操作，防止RNA酶污染；
5、DEPC处理的水：0.1%DEPC 即0.1mlDEPC加入100ml去离子水中，37℃孵育12小时，高压灭菌15分钟去除DEPC；
6、玻璃器皿的去RNA酶处理： 0.1%DEPC浸泡，37℃孵育12小时，高压蒸汽灭菌至少15分钟，去除DEPC。
步骤：
1、12孔板细胞准备：
吸弃培养基，1×PBS洗2次；备用
2、12孔板，每孔加入300ulTPK裂解液，（注意：使用前向TRK Lysis Buffer 中以20ul/Ml 的浓度加入β巯基乙醇），使其充解，匀浆混匀；
3、加入等体积70%无水乙醇，充分吹打混匀；
4、将上述混合液加入HiBind RNA Mini 柱内，下接2ml 收集管，每次加750ul，序贯加入，10，000×g，室温离心1分钟，
5、更换收集管，加入RNA Wash Buffer 300ul，10，000×g，室温离心1分钟；
6、再次加入，加入RNA Wash Buffer 500ul，10，000×g，室温离心1分钟；
7、更换收集管，加入RNA Wash Buffer 500ul，10，000×g，室温离心1分钟，（注意：实验前向RNA Wash中加入无水乙醇48ml）；
8、再次加入RNA Wash Buffer 500ul，10，000×g，室温离心1分钟；
9、丢弃收集管的液体，10，000×g，室温离心2分钟，使柱子无液体流出；
10、将柱子移至1.5ml的去RNA酶的EP管上，加入预热70℃的DEPC处理水30ul ，洗脱RNA（注意：确保水直接加入旋转柱中心基质内，不要贴壁），13，000×g，室温离心1分钟室温。
11、取少许定量，余-80℃贮存。下载本文
